癌相关纤维母细胞在卵巢癌恶性行为中的可能作用

发布时间：2018-04-16 05:28

  本文选题：CAFs + 癌细胞　； 参考：《重庆医科大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的：从不同组织类型卵巢癌组织中提取癌相关纤维母细胞（CAFs），探讨CAFs在卵巢癌恶性行为中的可能作用。 方法：1.从不同病理组织类型的卵巢癌组织中提取、分离、培养CAFs与癌细胞，用免疫细胞化学法对CAFs予以鉴定，并与正常纤维母细胞（NFs）相区分；2.利用免疫组织化学法检测卵巢癌原发病灶与转移病灶之间CAFs密度差异，并用酶联免疫反应吸附法测定各肿瘤病灶中分离的相同数目CAFs所分泌的SDF-1含量；3.采用matrigeltranswell侵袭实验比较从不同卵巢癌组织中提取的CAFs与癌细胞的侵袭能力；4.将CAFs分别与三种上皮性卵巢癌细胞株（SKOV3/OVCAR-3/HEY）行体外间接共同培养，通过transwell迁移实验检测不同卵巢癌组织中提取的CAFs对三种细胞株迁移能力的影响；5.利用单细胞凝胶电泳实验比较从相同组织中提取的CAFs与癌细胞经顺铂处理后的凋亡程度，检测其对顺铂治疗的反应性；并用免疫荧光法检测顺铂处理前后CAFs中α-SMA的表达情况。 结果：1.免疫细胞化学结果显示从卵巢癌组织中提取的CAFs呈α-SMA高表达,而正常卵巢组织中提取的正常纤维母细胞几乎不表达α-SMA；2.免疫组化染色提示卵巢癌肠道转移灶中CAFs密度明显高于原发病灶、网膜转移灶，但原发癌灶与各转移灶中相同数目的CAFs所分泌的SDF-1量无统计学差异；3.卵巢癌组织中提取的CAFs，其侵袭力明显强于同体组织中提取的癌细胞（P0.01）；4.将CAFs分别与三种细胞株体外间接共同培养，发现SKOV3、HEY两者细胞株的迁移力明显增加（P0.01），而OVCAR-3细胞迁移力增加无明显统计学意义（P=0.05）；5.单细胞凝胶电泳显示，用顺铂处理同体提取的CAFs与癌细胞后，癌细胞的凋亡比例明显强于CAFs（P0.01），说明CAFs对顺铂化疗不敏感；并且经顺铂处理后，CAFs的α-SMA表达增强（P0.01）。 结论：卵巢癌原发病灶与转移病灶中CAFs的密度存在差异，提示CAFs的表达可能参与了卵巢癌远处器官特异性转移，这种转移特异性可能与相应部位CAFs的数目有关；CAFs能促进上皮性卵巢癌细胞株的迁移运动，且表现出比癌细胞更强的恶性浸润能力；与癌细胞相比较，CAFs对顺铂化疗不敏感，且经顺铂处理后其α-SMA表达反而升高，这一结果提示CAFs可能参与了卵巢癌耐药或化疗后复发,但机制有待进一步探讨。
[Abstract]:Objective: to study the possible role of CAFs in malignant behavior of ovarian cancer by extracting cancer associated fibroblasts from different types of ovarian cancer.Method 1: 1.CAFs and cancer cells were isolated and cultured from ovarian cancer tissues of different pathological types. CAFs was identified by immunocytochemistry and differentiated from normal fibroblasts.Immunohistochemical method was used to detect the difference of CAFs density between primary focus and metastatic focus of ovarian cancer. The SDF-1 content of the same number of CAFs isolated from each tumor was determined by enzyme linked immunosorbent assay (Elisa).Matrigeltranswell invasion assay was used to compare the invasiveness of CAFs extracted from different ovarian cancer tissues with that of cancer cells.CAFs was cultured indirectly with three epithelial ovarian cancer cell lines (SKOV3 / OVCAR-3 / HEY) in vitro. The effect of CAFs extracted from different ovarian cancer tissues on the migration ability of the three cell lines was detected by transwell migration assay.The degree of apoptosis of CAFs extracted from the same tissues was compared with that of cancer cells treated with cisplatin by single cell gel electrophoresis, and the reactivity to cisplatin treatment was detected, and the expression of 伪 -SMA in CAFs before and after Cisplatin treatment was detected by immunofluorescence method.The result is 1: 1.The results of immunocytochemistry showed that the CAFs extracted from ovarian cancer showed high expression of 伪 -SMA, while the normal fibroblasts from normal ovarian tissues almost did not express 伪 -SMA2.Immunohistochemical staining showed that the density of CAFs in the metastatic focus of ovarian cancer was significantly higher than that in the primary tumor and omentum metastasis, but there was no significant difference in the amount of SDF-1 secreted by the same number of CAFs between the primary tumor and the metastatic foci.The invasiveness of CAFs extracted from ovarian cancer tissues was significantly stronger than that of cancer cells extracted from the same tissues.Indirect co-culture of CAFs and three cell lines in vitro showed that the migration ability of SKOV3 and HEY cell lines was significantly increased, while that of OVCAR-3 cells was not significantly increased.Single cell gel electrophoresis showed that the apoptosis rate of CAFs extracted by cisplatin was significantly higher than that of cancer cells, indicating that CAFs was insensitive to cisplatin chemotherapy, and the 伪 -SMA expression of Cisplatin was enhanced after treatment with Cisplatin.Conclusion: there are differences in the density of CAFs between primary and metastatic lesions of ovarian cancer, suggesting that the expression of CAFs may be involved in the distant organ specific metastasis of ovarian cancer.This metastasis specificity may be related to the number of CAFs in the corresponding site, which can promote the migration of epithelial ovarian cancer cell lines and exhibit a stronger ability of malignant invasion than that of cancer cells, and is not sensitive to cisplatin chemotherapy compared with cancer cells.The expression of 伪 -SMA increased after cisplatin treatment, which suggests that CAFs may be involved in the relapse of ovarian cancer after chemotherapy or drug resistance, but the mechanism needs further study.
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.31

【共引文献】

相关期刊论文 前10条

1 ;The ratio of MMP-2 to TIMP-2 in hilar cholangiocarcinoma:a semi-quantitative study[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2004年04期

2 张茂兰;阮长顺;曾国明;杨学恒;王远亮;;一种具有光学特性的新型哌嗪衍生物晶体的合成与表征[J];功能材料;2011年12期

3 宋惠云;何昕;周红梅;;肿瘤相关成纤维细胞与内皮细胞交互作用的研究进展[J];国际口腔医学杂志;2008年02期

4 郑晓斌;陈作良;;口腔癌相关成纤维细胞的研究进展[J];国际口腔医学杂志;2010年02期

5 刘明;谢勉;陈如冲;;肿瘤相关成纤维细胞通过分泌IL-6促进非小细胞肺癌的生长[J];第三军医大学学报;2013年17期

6 王健;吴爱东;张红雁;钱立庭;;前列腺癌调强适形放疗的临床疗效和副反应分析[J];安徽卫生职业技术学院学报;2013年05期

7 白皓;韩宝惠;;手术在非小细胞肺癌单发脑转移治疗中的作用分析[J];中国肺癌杂志;2013年12期

8 许伟;位云艳;谭瑶曦;徐玮;程雁;吴剑卿;;干细胞转录因子Sox2在肺癌中的表达和意义[J];中国肺癌杂志;2013年11期

9 白倩;谢琦;彭晓莉;常徽;朱俊东;糜漫天;;二氢杨梅素通过抑制甲基转移酶诱导人乳腺癌MCF-7细胞PTEN基因去甲基化[J];第三军医大学学报;2014年01期

10 孙多祥;周颖;胡卫平;;上皮性卵巢癌生物学标志物的研究进展[J];癌症进展;2013年06期

相关会议论文 前9条

1 吴魏芹;张晓媛;徐海凤;徐静;沈捷;卢凯华;;肺癌细胞DAPK基因启动子甲基化与Gefitinib敏感性的相关性研究[A];2013华东胸部肿瘤论坛暨第六届浙江省胸部肿瘤论坛论文集[C];2013年

2 吴魏芹;卢凯华;张梅玲;金时代;;盐酸埃克替尼治疗42例晚期非小细胞肺癌的临床观察[A];2013华东胸部肿瘤论坛暨第六届浙江省胸部肿瘤论坛论文集[C];2013年

3 ;Association between phospholipase C epsilon gene(PLCE1)polymorphism and colorectal cancer risk in a Chinese population[A];2013年浙江省肛肠外科学术年会暨结直肠疾病的微创及综合治疗新进展学习班论文汇编[C];2013年

4 刘敏霞;周可成;曹毅;;新的肺癌相关基因MCRS1病理生理功能研究[A];第十六届中国科协年会——分3环境污染及职业暴露与人类癌症学术研讨会论文集[C];2014年

5 王婧;赖宗浪;侯丽;李冬云;张雅月;马薇;褚雨霆;石凤芹;杨璐;陈信义;;The Effects of Compound Ze Bei Granules(复方浙贝颗粒) Combined with Chemotherapy on Surface Markers of Leukemia Stem Cell in Patients with Acute Myeloid Leukemia[A];中华中医药学会第二届岐黄论坛——血液病中医药防治分论坛论文集[C];2014年

6 李丹;张阳;;胰腺癌内科治疗策略及优化[A];中国肿瘤内科进展 中国肿瘤医师教育（2014）[C];2014年

7 沈胤晨;韩晓红;;外周血肿瘤标志物的研究进展[A];中国肿瘤内科进展 中国肿瘤医师教育（2014）[C];2014年

8 李文迪;姚宏伟;徐智;石雪迎;张元福;徐怡庄;;傅里叶变换红外光谱用于结直肠癌手术切缘判断的研究[A];第十八届全国分子光谱学学术会议论文集[C];2014年

9 Lomg Zhai;Yili Wu;Dongfeng Zhang;;A dose-response meta-analysis of α-linolenic acid and linoleic acid consumption and prostate cancer[A];产业竞争力与创新驱动——2014年山东省科协学术年会论文集[C];2014年

相关博士学位论文 前10条

1 谢荣凯;CCL5在卵巢癌干细胞侵袭转移中的作用及其机制研究[D];第三军医大学;2011年

2 马婧薇;天然免疫细胞产生的微颗粒在肝癌细胞侵袭和转移中的作用及其机制[D];华中科技大学;2012年

3 郑秀海;胆囊收缩素在胆管癌神经周围浸润转移中的作用及其分子机制[D];第三军医大学;2005年

4 赵海锋;兔骨髓间充质干细胞对肿瘤局部免疫功能影响的实验研究[D];山东大学;2008年

5 姚勤;CLIC4参与上皮性卵巢癌肿瘤间质相关成纤维细胞的转化及其microRNAs调控[D];山东大学;2009年

6 娄楠;人成骨肉瘤细胞系中高侵袭及类肿瘤干细胞亚系的建立[D];吉林大学;2010年

7 张海利;MTA1基因表达与喉鳞癌侵袭转移的相关性及其调控作用的研究[D];山西医科大学;2012年

8 赵旌旌;芦笋老茎生物学活性研究[D];华东师范大学;2012年

9 吴晶晶;HMGA2在卵巢癌上皮间质转化过程中的作用及机制研究[D];山东大学;2012年

10 张明慧;人骨髓间充质干细胞对肺癌细胞增殖转移及自噬凋亡的调控作用研究[D];第三军医大学;2013年

相关硕士学位论文 前10条

1 李强;口腔癌中癌相关成纤维细胞体外生物学行为研究[D];南京医科大学;2009年

2 王蓉;裸鼠荧光原位移植非小细胞肺癌模型转移相关microRNAs的研究[D];南京医科大学;2010年

3 王洁;P-选择素，CD24在肺癌组织中的表达及其临床意义[D];吉林大学;2011年

4 肖宁;泛素特异性蛋白酶4（USP4）去泛素化TRAF2/6以及抑制TNFα诱导的细胞迁移[D];华东师范大学;2011年

5 王娟娟;关于microRNA沉默SMYD3对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响及SMYD3调控c-Myc机理的研究[D];宁波大学;2010年

6 肖梅;134例肝门部胆管癌临床诊治的回顾性分析和50例胆管癌中MMP-2/TIMP-2表达定量研究及其临床意义[D];中国人民解放军军医进修学院;2003年

7 杨春明;E钙粘蛋白及β连接素在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义[D];中国医科大学;2003年

8 李铸;老年性肝门部胆管癌的临床分析与P27蛋白，，PCNA在肝门部胆管癌的表达及临床意义[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年

9 牟联军;肌成纤维细胞在食管癌组织中的分布及可能的病理学意义[D];汕头大学;2007年

10 宋惠云;口腔癌相关成纤维细胞对血管内皮细胞生物学特性的影响[D];四川大学;2007年

本文编号：1757511