抑制miR-23a表达增强卵巢癌细胞顺铂敏感性的分子机制研究

发布时间：2018-04-18 08:53

本文选题：微小RNA + 顺铂　；参考：《安徽医科大学》2016年博士论文

【摘要】：背景卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一,发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌而列居第三位,致死率方面,卵巢上皮癌死亡率高于其他各妇科肿瘤,是致死率最高的癌症,对妇女生命造成严重威胁。肿瘤组织耐药性常常导致癌症细胞化疗药物敏感性降低,因此,研究卵巢癌肿瘤细胞耐药性,增强肿瘤细胞的药物敏感性的方法在肿瘤治疗及延长癌症患者生存时间有着非常重要的意义。虽然如今铂类抗肿瘤药物肿瘤越来越多,但因为铂类抗肿瘤药物在化学结构上都非常相似,与肿瘤组织细胞的作用机制也相同,临床使用过程中的耐药性或者交叉耐药性已经成为了顺铂类抗肿瘤药物继续推广的最大障碍。克服限制铂类抗肿瘤药物的耐药性或交叉耐药性,提高肿瘤组织细胞的顺铂药物敏感性,指导并拓展临床应用都具有重要的意义。目的MicroRNA是最近发现存在于细胞质中的一大类短小非编码RNA,具有广泛的基因转录后水平调控作用,铂类药物耐药的卵巢癌细胞株中miR-23A表达明显上升,以我们推测miR-23A基因表达的异常上调将有可能影响肿瘤细胞的化疗敏感性,可能在卵巢癌的化疗耐药中发挥了作用。本研究将基于RNA沉默技术抑制卵巢癌组织细胞中miR-23A基因的表达,考察基因沉默后卵巢癌细胞顺铂敏感性的变化,分析抑制miR-23A表达后,耐药卵巢癌A2780细胞对化疗药物顺铂的敏感性变化及其初步机制,进而为临床解决卵巢癌化疗过程中耐药性困扰提供新的思路和方案。方法对卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780进行培养后,分别培养耐药性和非耐药性的卵巢癌肿瘤组织细胞,将细胞分为两组,其中A组耐药性肿瘤组织细胞,B组为非耐药性卵巢癌肿瘤组织细胞,应用RT-PCR方法检测耐药/非耐药性卵巢癌肿瘤组织细胞中miR-23A表达水平;应用MTT法检测antago mir-23a抑制miR-23A并经铂处理后细胞增殖抑制率;流式细胞分析细胞周期分布;Hoechst33258染色分析细胞凋亡形态学变化;Western blot法分析耐药糖蛋白P-gp的表达变化;Western blot考察卵巢癌肿瘤组织细胞中E-cadherin及N-cadherin表达水平的变化;Transwell实验考察卵巢癌肿瘤组织细胞的迁移能力。应用SPSS20.0统计软件。正态分布的计量资料用均值±标准差(±s)表示,组间比较采用t检验;非正态分布的计量资料用中位数表示;计数资料用例数和率表示,组间比较采用卡方检验。结果耐药性卵巢癌肿瘤组织细胞中miR-23A的表达水平明显高于非耐药性卵巢癌肿瘤组织细胞,差异具有统计学意义;抑制miR-23A并经铂处理后,细胞增殖抑制率显著上升(P0.01),药物中效浓度IC50为17.89μmol/L,比对照组IC50110.18μmol/L降低了83.76%(P0.01),细胞被阻滞于G0/G1期且凋亡率增加(P0.01);Hoechst33258染色见细胞核浓缩、染色增强。Western blot检测提示细胞P-gp蛋白表达随着顺铂浓度加大而逐渐减低(P0.001);miR-23A被抑制后,卵巢癌肿瘤组织细胞中E-cadherin及N-cadherin表达水平发生明显变化,卵巢癌肿瘤组织细胞的侵袭转移能力明显减弱(P0.001);Transwell实验表明,miR-23A被抑制后,卵巢癌肿瘤组织细胞的迁移能力降低明显(P0.001)。结论抑制耐药卵巢癌A2780细胞内miR-23A表达后,细胞对顺铂的敏感性显著增加,这可能miR-23A靶基因负性调控因素得以缓解,并由此引发P-gp蛋白表达受抑有关。基于本研究的实验结果及已证实的相关结果,我们推测,耐药卵巢癌A2780细胞中miR-23A表达显著增高,miR-23A与Runx3 3'UTR区结合,抑制Runx3的表达,从而限制了Runx3对MDR1的表达沉默作用,使得耐药细胞P-gp表达明显上升,进而通过经典途径发挥了耐药作用。而抑制miR-23A的表达使其调控作用减弱,可提高Runx3的表达量,促进Runx3对MDR1的表达沉默作用,使得P-gp蛋白表达减少,不同程度的抑制了经典耐药途径作用,从而提高耐药细胞对顺铂的敏感性。
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【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31

【参考文献】