槲皮素诱导宫颈癌HeLa细胞发生自噬和凋亡的实验研究

发布时间：2018-05-01 05:09

本文选题：HeLa细胞 + LC3　；参考：《武汉大学》2016年博士论文

【摘要】：第一部分槲皮素诱导宫颈癌HeLa细胞自噬的研究目的：检测不同浓度的槲皮素对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用,观察在槲皮素作用HeLa细胞的过程中,细胞内自噬水平的变化,并初步探讨影响自噬可能的机制。方法：利用MTT法检测不同浓度的槲皮素对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用,通过单丹磺酰戊二胺(MDC)荧光染色观察HeLa细胞内的自噬水平,免疫印迹法检测LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化水平及Beclin 1、active caspase 3、p-S6Kl的蛋白表达水平,用透射电镜(TEM)观察细胞内自噬的超微结构。结果：槲皮素能显著抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,其抑制作用呈浓度依赖性。MDC荧光染色显示HeLa细胞经不同浓度的槲皮素处理后,绿色荧光在其浓度为50μmol/L时达到最强,随后减弱。免疫印迹结果显示槲皮素浓度在50μmol/L以下时,LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化水平及Beclin 1蛋白的表达水平逐渐上升,而在100μmol/L时下降,active caspase 3蛋白水平随着槲皮素浓度的增高而逐渐升高,S6K1的磷酸化水平随着自噬水平的逐渐升高而降低。透射电镜超微结构的观察表明在槲皮素浓度为50μmol/L时HeLa细胞内的自噬溶酶体最多。结论：槲皮素对宫颈癌HeLa细胞的增殖有明显的抑制作用,槲皮素能诱导HeLa细胞发生自噬,随着槲皮素浓度的增加,在50μmol/L的槲皮素作用时细胞内自噬水平最强,在100μmol/L时较前减弱,其机制可能与mTORCl通路调控有关。第二部分槲皮素抑制宫颈癌HeLa细胞增殖中自噬与凋亡的关系目的：探讨中药槲皮素抑制宫颈癌HeLa细胞增殖过程中自噬与凋亡之间的关系,抑制自噬后对细胞凋亡的影响。方法：将槲皮素作用HeLa细胞,利用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制自噬,MTT法检测自噬抑制后槲皮素对HeLa细胞增殖的影响,AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测槲皮素对HeLa细胞凋亡率的影响,免疫印迹法检测细胞内LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化水平和active caspase 3蛋白的表达。结果：用3-MA抑制自噬后,槲皮素对HeLa细胞的增殖抑制率增高,细胞凋亡率增高。LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化率降低,提示这一自噬过程能够被3-MA抑制。而active caspase 3蛋白的表达升高,说明抑制自噬后促进了细胞的凋亡。结论：抑制自噬能增加槲皮素对宫颈癌HeLa细胞的抑制作用,细胞的凋亡率增加,低浓度的槲皮素作用时,自噬发挥保护作用,自噬的下调能增强HeLa细胞对槲皮素治疗的敏感性。第三部分自噬在槲皮素抑制裸鼠移植瘤生长中的作用研究目的：研究自噬在槲皮素抑制裸鼠宫颈癌移植瘤生长中的作用。方法：建立裸鼠宫颈癌的动物模型,利用3-甲基腺嘌呤(3-MA)和槲皮素干预移植瘤的生长,观察不同的干预措施对移植瘤生长的影响,测量肿瘤大小的变化,HE染色观察移植瘤的病理特征,免疫组化检测移植瘤中Beclin 1和LC3-Ⅱ的表达。结果：对照组、槲皮素组、3-MA+槲皮素组三组之间用药前后移植瘤大小的比较差异具有统计学意义,槲皮素能够在体内抑制裸鼠移植瘤的生长,3-MA+槲皮素组对裸鼠移植瘤的抑制作用较单用槲皮素组增加,3-MA能够增强槲皮素的抗肿瘤作用,肿瘤的生长得到了进一步的抑制,HE染色见3MA+槲皮素组移植瘤组织中明显的坏死区,槲皮素组中可见部分坏死区,而对照组中坏死区不明显,Beclin1和LC3-Ⅱ的表达在3-MA+槲皮素组中最低。结论：槲皮素能够在体内抑制裸鼠移植瘤的生长,抑制自噬能增加槲皮素对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。
[Abstract]:The effect of quercetin on the proliferation of HeLa cells was observed by MTT assay . The results showed that quercetin could inhibit the proliferation of HeLa cells . The results showed that quercetin could inhibit the proliferation of HeLa cells . The results showed that quercetin could inhibit the growth of transplanted tumor in nude mice . The results showed that quercetin could inhibit the growth of transplanted tumor in nude mice . The results showed that quercetin could inhibit the growth of transplanted tumor in nude mice .

【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.33

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