自噬在小鼠围着床期子宫中的作用

发布时间：2018-05-18 14:20

本文选题：胚胎着床 + 蜕膜化　；参考：《重庆医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的胚胎着床是妊娠的关键环节,是具备着床能力的胚胎与容受态子宫建立紧密联系的过程。围着床期小鼠子宫主要依赖以下步骤完成胚胎着床过程:小鼠子宫在孕D4天处于容受态,子宫内膜处于允许囊胚粘附的状态;在小鼠孕D5天,囊胚粘附并侵入子宫内膜,子宫内膜基质细胞随即广泛地增殖和分化,发生蜕膜化样改变,孕D6天形成初级蜕膜区。胚胎的正常着床对于后续妊娠维持、分娩均起着重要的作用。然而,目前关于胚胎着床机制的研究还不够全面。自噬是存在于真核细胞的普遍现象,依赖溶酶体对物质进行降解,来维持细胞稳态以及细胞内物质的更新。近年研究证实自噬参与了肿瘤的发生发展;胚胎侵入子宫与肿瘤发生过程存在相似性,但是自噬是否参与胚胎着床过程并未见报道。课题组前期基因芯片研究发现孕D5天小鼠着床点子宫内膜中自噬相关标志分子的表达低于着床旁子宫内膜。因此,我们推测自噬可能参与了围着床期子宫内膜正常功能的维持,进而调节胚胎着床。方法1.自噬相关标志分子在围着床期小鼠子宫内膜中的表达1)建立小鼠正常妊娠模型,收集孕D4、D5、D6天小鼠子宫内膜,采用westernblot检测小鼠围着床期子宫内膜中自噬相关标志分子lc3、atg5的表达。2)建立小鼠正常妊娠模型,收集孕d5天着床点与着床旁子宫内膜组织。采用透射电镜寻找自噬小体,分别用real-timepcr和westernblot检测自噬相关标志物cathepsinb、p62等分子在着床点和着床旁子宫内膜组织中的表达。3)建立自噬抑制剂3-ma干预的小鼠妊娠模型,收集孕d5天小鼠子宫着床点与着床旁子宫内膜组织;验证模型建立成功后,尾静脉注射台盼蓝后观察小鼠胚胎着床情况,he染色观察自噬被抑制后小鼠子宫组织形态的改变。并采用westernblot检测自噬抑制后蜕膜化标志因子hoxa10、pr的表达。2.自噬在子宫蜕膜化中的作用1)建立假孕小鼠人工诱导蜕膜化模型,收集诱导蜕膜化侧和对照侧子宫内膜组织;分别使用real-timepcr和westernblot检测自噬相关标志物cathepsinb、atg5、p62等分子在诱导蜕膜化侧以及对照侧子宫内膜中的表达。体外分离并培养小鼠子宫基质细胞,诱导细胞蜕膜化后,westernblot检测自噬相关标志物lc3、atg5、p62的表达。2)建立自噬抑制剂3-ma干预的假孕小鼠人工诱导蜕膜化模型,验证模型建立成功后,使用westernblot检测自噬抑制后蜕膜化标志因子hoxa10、pr的表达,he染色观察自噬被抑制后的子宫组织形态。体外分离并培养小鼠子宫基质细胞,自噬抑制剂3-ma处理细胞后诱导基质细胞蜕膜化,检测蜕膜化标志因子hoxa10、pr的表达。结果1.自噬相关标志分子在围着床期小鼠子宫内膜中的表达1)自噬相关标志物lc3-ii、atg5在小鼠孕d5、d6天子宫内膜组织中的表达水平较孕d4天显著降低。2)自噬小体的数目在孕d5天着床点低于着床旁,自噬相关标志分子cathepsinb、p62mrna水平及蛋白水平在小鼠孕d5天着床点显著低于着床旁。3)自噬抑制剂3-ma干预后,肉眼观察可见孕鼠胚胎着床点数量无显著差异,但分布不均。he检测发现小鼠孕d5天子宫腔上皮出现异常折叠且植入室闭合不完全。此外,子宫蜕膜化标志因子hoxa10、er-α、pr蛋白的表达均显著降低。2.自噬在子宫内膜蜕膜化中的作用1)与对照侧相比,人工诱导蜕膜化侧的小鼠子宫内膜组织中自噬相关标志分子p62、atg5、cathepsinb、ulk1以及becn1mrna表达显著降低;自噬相关分子lc3-ii、atg5以及p62蛋白在诱导蜕膜化侧子宫内膜组织中的表达显著下调。原代分离培养小鼠子宫内膜基质细胞,体外诱导蜕膜化后,自噬相关标志物lc3-ii、atg5、p62蛋白表达水平较未诱导的基质细胞显著降低。2)肉眼观察发现,与对照组相比,自噬抑制剂3-MA干预组中诱导蜕膜化侧子宫外观异常,且子宫湿重显著降低;HE染色显示,在自噬抑制剂3-MA的作用下,诱导蜕膜化侧子宫内膜细胞界限不清;蜕膜化标志因子HOXA10、PR蛋白的表达水平在自噬受到抑制后显著下调。此外,在自噬抑制剂3-MA的作用下,体外诱导基质细胞蜕膜化后,蜕膜化标志因子HOXA10、PR的表达较对照组均显著降低。结论本研究提示自噬参与围着床期子宫内膜功能的正常维持,其可能与妊娠早期小鼠子宫内膜蜕膜化有关,但其具体影响过程和机制有待进一步研究。
[Abstract]:Objective : To establish a normal pregnancy model of mice , and to study the expression of autophagy - related marker molecules ( lc3 , atg5 ) in the endometrium of pregnant mice . The expression of autophagy - related markers lc3 - ii , atg5 and p62 in the endometrium of mice induced by autophagy was significantly lower than that in the control side .
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R714

【参考文献】