晚卵泡期孕酮水平对卵巢中反应者子宫内膜容受性的影响

发布时间：2018-05-26 03:42

本文选题：孕酮 + 子宫内膜容受性　；参考：《郑州大学》2016年博士论文

【摘要】：目的:通过回顾性分析控制性超排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)过程中,卵巢不同反应患者,晚卵泡期高孕酮对IVF-ET妊娠结局的影响,研究卵巢中反应患者晚卵泡期高孕酮状态下对子宫内膜组织学、形态学及整合素аvβ3、白血病抑制因子(leukaemia inhibitory factor,LIF)、白介素-1(inerleukin-1,IL-1)表达的影响,采用RNA-seq技术分析卵巢中反应者高孕酮对子宫内膜基因表达谱的变化,并用q RT-PCR技术验证差异基因,分析差异基因的功能,探索COH过程中,晚卵泡期孕酮水平的提早升高对子宫内膜容受性影响的可能机制,以期对临床工作者针对晚卵泡期孕酮水平升高,做出合理的处理方案及预防措施提供理论依据。方法1、COH中卵巢不同反应者晚卵泡期高孕酮对IVF-ET妊娠结局的影响回顾性分析2003年1月—2013年12月在郑州大学第二附属医院生殖医学中心行长方案IVF-ET助孕患者临床资料,共纳入本研究3841个周期,按照获卵数分为卵巢高反应组:获卵数≥20,842例;卵巢中反应组:5获卵数20,2008例;卵巢低反应组:获卵数≤5,991例。将总人群及不同卵巢反应组患者HCG日血清孕酮水平分为以下8组:≤1.00,1.00-1.25,1.25-1.5,1.5-1.75,1.75-2.00,2.00-2.25,2.25-2.5,2.5ng/ml。计算每个孕酮区间的临床妊娠率,以及每个孕酮区间组与最低孕酮组(P≤1ng/ml)相比临床妊娠率的OR值和95%可信区间,寻找出卵巢高、中、低反应组孕酮升高的切点值。以此切点值为界点,比较不同卵巢反应人群中孕酮升高组和未升高组的临床妊娠率、着床率及各项临床指标的差异。并采用logistic回归分析不同卵巢反应人群孕酮水平升高的影响因素。2、COH中晚卵泡期高孕酮对卵巢中反应患者子宫内膜组织学、胞饮突发育、整合素аvβ3、LIF、IL-1的影响选取2014年4月—2015年12月在郑州大学第二附属医院生殖医学中心行长方案的IVF-ET助孕患者,所有入选患者均为卵巢中反应患者,在本次取卵周期取消移植,并签署知情同意书。按照HCG日孕酮水平分组:孕酮升高组:n=18,HCG日孕酮≥2.25ng/ml;孕酮未升高组:n=11,HCG日孕酮2.25ng/ml。取卵后5天采集子宫内膜组织,并分为三部分:一部分用无菌生理盐水漂洗三遍,放入预先配置的2%戊二醛PBS固定液中;一部分用无菌生理盐水漂洗后,放入10%中性福尔马林溶液中;一部分迅速投入液氮中保存备用。采用HE染色观察比较两组子宫内膜组织学变化,扫描电镜观察两组子宫内膜胞饮突变化,免疫组化方法及western blot方法检测两组子宫内膜整合素аvβ3、LIF、IL-1的表达变化。3、应用RNA-seq技术分析COH中晚卵泡期高孕酮对卵巢中反应者子宫内膜容受性相关基因表达谱的变化选取2014年4月—2015年12月在郑州大学第二附属医院生殖医学中心行长方案的IVF-ET助孕患者,所有入选患者均为卵巢中反应患者,在本次取卵周期取消移植,并签署知情同意书。根据HCG日血清孕酮水平进行分组:孕酮升高组:n=6,HCG日孕酮≥2.25ng/ml;孕酮未升高组:n=6,HCG日孕酮2.25ng/ml。取卵后5天采集子宫内膜组织,使用RNase-free水漂洗后分装成两份,迅速投入液氮中保存备用。采用RNA-seq技术分析两组子宫内膜基因表达谱的变化,筛选出差异表达基因,用q RT-PCR方法验证部分差异基因,并分析相关基因的功能。结果1、COH中卵巢不同反应者晚卵泡期高孕酮影响IVF-ET妊娠结局随着卵巢反应性增加,HCG日血清孕酮切点值升高,卵巢高、中、低反应组切点值分别为2.5ng/ml、2.25 ng/ml、1.5 ng/ml。随着孕酮水平升高,卵巢不同反应组的临床妊娠率和胚胎种植率均明显下降(P0.05),但受精率、卵裂率及优质胚胎率无明显差异(P0.05)。通过logistic回归分析,提示不同卵巢反应人群中获卵数、促性腺激素(gonadotropin,Gn)用量均与孕酮水平升高成正相关(P0.05)。2、COH中晚卵泡期高孕酮使卵巢中反应者子宫内膜分泌期、胞饮突发育提前,降低整合素аvβ3、LIF、IL-1的表达高孕酮组分泌中期的子宫内膜的比例高于孕酮未升高组(P0.05);高孕酮组子宫内膜胞饮突出现皱缩,孕酮未升高组胞饮突呈发育中、发育成熟状态;高孕酮组子宫内膜中整合素аvβ3(0.212±0.05 vs 0.47±0.032)、LIF(0.137±0.027 vs 0.531±0.056)、IL-1(0.264±0.018 vs 0.515±0.023)蛋白表达量均低于孕酮未升高组(P0.05)。3、RNA-seq技术分析晚卵泡期高孕酮影响了卵巢中反应者子宫内膜容受性相关基因的表达:高孕酮组和孕酮未升高组共有31个显著性差异基因,其中上调基因15个基因,下调基因16个。采用q RT-PCR验证部分差异表达基因,其中SLC7A4、DDX5、IFI6、HLA-DRB4、HLA-DRB5、SCGB1D2与RNA-seq结果一致,它们的变化可能与晚卵泡期孕酮提早升高影响子宫内膜容受性有关。结论1、HCG日孕酮水平的提早升高不影响卵子及胚胎质量,可能通过影响子宫内膜容受性,从而降低了IVF-ET的临床妊娠率及着床率;随着卵巢反应性增加,HCG日孕酮阈值水平升高;Gn用量和获卵数可能与晚卵泡期孕酮升高有关。2、卵巢中反应人群HCG日高孕酮患者种植窗期子宫内膜组织学、形态学、分子表达发生改变,可能使种植窗期子宫内膜的发育提早成熟,导致胚胎-子宫内膜对话失败。3、通过RNA-seq技术分析HCG日孕酮水平的提早升高可能影响了种植窗期子宫内膜容受性相关基因的表达,并用q RT-PCR验证部分差异表达基因,为进一步探索其具体的分子作用机制提供了相应的基因靶点。
[Abstract]:Objective : To study the effect of high progesterone on the outcome of IVF - ET during the late follicular phase of ovarian response patients , and to investigate the effect of high progesterone on the outcome of IVF - ET during the late follicular phase . Serum progesterone levels in women with different ovarian response were determined by using RNA - seq technique . Results 1 . The results showed that the number of pregnant women in the ovarian response group was higher than that in the ovarian response group ( P0.05 ) . Conclusion The results indicate that the early increase of progesterone level in the ovarian response population does not affect the endometrium ' s tolerance . Conclusion : The early increase of progesterone level in the ovarian response group may affect the endometrium ' s tolerance .
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R714.8

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