不同剂量照射对宫颈癌细胞PIWIL2蛋白表达及部分生物学指标影响的研究

发布时间：2018-06-09 12:27

本文选题：宫颈癌细胞 + X线照射　；参考：《西南医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:探讨不同剂量X线照射对宫颈癌Hela细胞PIWIL2蛋白表达及HPV病毒、细胞凋亡、细胞周期分布变化的影响,并分析照射后宫颈癌Hela细胞PIWIL2蛋白表达与HPV病毒、细胞凋亡和细胞周期分布变化的相关性。方法:(1)宫颈癌Hela细胞的培养:以含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基,置于CO2浓度为5%、温度为37℃、饱和湿度的恒温培养箱培养,细胞培养至对数期进行实验处理。(2)分组及X线照射:设置对照组(0Gy组)、2Gy组、4Gy组、8Gy组,采用6MV X线直线加速器照射,照射距离100cm,剂量率400cGy/min,分别给予剂量0Gy、2Gy、4Gy、8Gy照射。(3)克隆集落形成实验:取对数期Hela细胞计数后接种于培养皿中,按分组及照射条件照射后继续培养14天进行染色计数克隆集落形成率及细胞存分数。(4)细胞周期及凋亡检测:将Hela细胞培养至对数期,按分组及照射条件照射后继续培养,采用流式细胞仪分别检测照射后6、12、24、48小时细胞周期分布及细胞凋亡率。(5)Western blot及荧光定量PCR法检测PIWIL2及HPV-18 E6/E7的表达:将Hela细胞培养至对数期,按分组及照射条件照射后继续培养,分别检测对照组及各实验组放疗后6、12、24、48小时PIWIL2及HPV E6/E7表达情况。结果:(1)各实验组在照射后48小时内piwil2蛋白的表达随时间推移呈先增加后降低,2gy组piwil2表达峰在照射后6小时,4gy组和8gy组在照射后12小时;hela细胞照射后6小时各实验组piwil2表达水平上调,但随照射剂增加上调作用逐渐下降,上调作用与照射剂量呈负相关(r=-0.898,p0.05),x线照射后12~48小时宫颈癌hela细胞piwil2表达呈剂量依赖性增加。(2)x线照射后hela细胞存活分数与照射后6小时piwil2表达水平呈正相关((r=0.921,p0.05),与照射后其它时间点piwil2表达无相关性(p0.05)。(3)与对照组比较,各实验组照射后g2/m期比例随时间推移先增加后降低,2gy组g2/m期阻滞峰在照射后6小时,4gy组和8gy组在照射后12小时;x线照射后g2/m期比列与piwil2蛋白表达水平随时间变化趋势一致,两者呈正相关(2gy组r=0.896,p0.05;4gy组r=0.903,p0.05;8gy组r=0.873,p0.05)。(4)照射后48小时内随时间推移各实验组18型hpve6/e7的表达均呈降低—增加—降低的趋势,2gy和4gy组照射后12、24小时其表达水平高于对照组(p0.05),其余时间点及8gy组各时间点18型hpve6/e7表达均显著受抑制(p0.05),照射后6、48小时小时18型hpve6/e7表达呈剂量依赖性降低;照射后48小时内18型hpve6/e7表达水平与piwil2的表达水平均无相关性(p0.05)。(5)2gy和4gy组x线照射后24小时内在各时间点的细胞凋亡率高于对照组(p0.05),与x线照射后24小时内piwil2表达呈负相关(2gy组r=-0.671,p0.05;4gy组r=-0.783,p0.05);8gy组x线照射后48小时内细胞凋亡率均高于对照组(P0.05),与照射后48小时内PIWIL2表达呈负相关(r=-0.595,P0.05)。结论:(1)X线照射后48h内Hela细胞PIWIL2蛋白表达水平上调,随时间推移其表达水平先增加后降低,2Gy组表达峰值在照射后6h,4Gy和8Gy组在照射后12h。(2)X线照射能抑制Hela细胞HPV18型E6/E7的表达,抑制作用呈剂量依赖性增加,但在4Gy以下剂量照射后12~24小时E6/E7表达明显增高;X线照射后Hela细胞HPV18型E6/E7的表达与PIWIL2表达无相关性。(3)X线照射后Hela细胞PIWIL2表达水平与G2/M期阻滞比例、细胞存活分数呈正相关。(4)X线照射后Hela细胞PIWIL2表达与细胞凋亡呈负相关。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of different doses of X - ray irradiation on the expression of PIWIL2 protein and HPV , apoptosis and cell cycle distribution in Hela cells of cervical cancer . Results : ( 1 ) After irradiation , the expression level of piwil2 protein in each experimental group was significantly lower than that in the control group ( r = - 0.898 , p < 0.05 ) . ( 5 ) The apoptosis rate of the cells was higher than that of the control group ( P < 0.05 ) within 24 hours after the irradiation of 2gy and 4gy groups . The apoptosis rate of the cells was significantly higher than that in the control group ( P 0.05 ) within 48 hours after irradiation with x - ray irradiation ( r = - 0.595 , P0.05 ) . Conclusion : ( 1 ) After X - ray irradiation , the expression level of pWIL2 protein in Hela cells increased , and the expression level of HPV18 E6 / E7 in Hela cells was significantly increased at 6h , 4Gy and 8Gy after irradiation .
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.33

【参考文献】