IL-17D对人上皮性卵巢癌细胞的体外影响

发布时间：2018-06-11 11:13

  本文选题：卵巢癌细胞 + IL-17D　； 参考：《河北医科大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的：以基因转染的方法建立能稳定表达和分泌IL-17D的人上皮性卵巢癌细胞株，通过检测基因转染前后卵巢癌细胞中IL-17D的表达差异以及外源性IL-17D转染对卵巢癌细胞表面NKG2D配体MICA的影响，探讨IL-17D对人卵巢癌细胞及固有免疫的体外影响。 方法： 1体外培养人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞SKOV3、空载体对照细胞SKOV3/vector、外源性人IL-17D基因稳定转染细胞SKOV3/IL-17D及顺铂耐药细胞SKOV3/CDDP；以及人卵巢腺癌细胞OVCAR3、空载体对照细胞OVCAR3/vector、IL-17D基因稳定转染细胞OVCAR3/IL-17D，连续传代培养，于倒置显微镜下观察细胞形态。 2MTT法检测不同浓度的顺铂对SKOV3及SKOV3/CDDP的抑制率，计算半数抑制浓度IC50及耐药细胞SKOV3/CDDP的耐药指数。 3MTT法检测不同时间点（12、24、48、72、96h）7种上皮性卵巢癌细胞的增殖情况，绘制生长曲线。 4提取7种上皮性卵巢癌细胞的RNA，利用real-time PCR在RNA水平检测7种卵巢癌细胞IL-17D的表达情况。 5应用流式细胞术（FCM）检测NKG2D主要活化性配体MICA在7种上皮性卵巢癌细胞表面的表达水平，以荧光指数（FI）表示MICA蛋白表达的相对含量。FI=试验品均道值/对照品均道值，均道值=lg(x-mode值)×340。 结果： 1人卵巢浆液性乳头状腺癌SKOV3/CDDP耐药指数=SKOV3/CDDP的IC50值/SKOV3的IC50值，即36.09/7.83=4.61，可进行耐药试验。 2人卵巢浆液性乳头状腺癌SKOV3细胞、人卵巢腺癌OVCAR3细胞分别组内两两比较，转染组生长速度明显快于未转染组与空载体组（P0.05），差异有统计学意义；未转染组与空载体组间无明显差异（P0.05）；耐药组SKOV3/CDDP细胞生长速度明显快于亲本未转染组（P0.05），差异有统计学意义；耐药组SKOV3/CDDP与转染组SKOV3/IL-17D比较无明显差异（P0.05）。 3qRT-PCR分别检测SKOV3、SKOV3/CDDP、SKOV3/vector、SKOV3/IL-17D及OVCAR3、OVCAR3/vector、OVCAR3/IL-17D七种细胞内IL-17D的表达。以2-ΔΔCт表示IL-17D的相对表达量。 以SKOV3细胞内IL-17D的表达为对照组，我们通过qRT-PCR可以检测出SKOV3/vector、SKOV3/IL-17D、SKOV3/CDDP细胞内IL-17D表达量分别为1.13±0.24、113.11±24.45、91.96±18.13，经单因素方差分析示组间比较差异有统计学意义（F=45.40，P=0.0000.05）；组内比较：SKOV3与SKOV3/vector、SKOV3/IL-17D与SKOV3/CDDP比较差异无统计学意义（P0.05），其余各组间比较差异均有统计学意义（P0.05）。 以OVCAR3细胞内IL-17D的表达为对照组，我们通过qRT-PCR可以检测出OVCAR3/vector、OVCAR3/IL-17D细胞IL-17D表达量分别为1.10±0.07、182.78±16.37，经单因素方差分析示组间比较差异有统计学意义（F=369.89，P=0.0000.05）；组内比较：OVCAR3与OVCAR3/vector比较差异无统计学意义（P0.05），其余各组间比较差异均有统计学意义（P0.05）。 结果显示：SKOV3/IL-17D及OVCAR3/IL-17D内IL-17D的含量均高于其未转染组和空载体对照组；耐药细胞SKOV3/CDDP内IL-17D的含量明显高于其亲本细胞SKOV3。 4FCM检测7种上皮性卵巢癌细胞表面MICA的表达。 SKOV3细胞组：经单因素方差分析显示组间比较差异有统计学意义（F=598.61，，P=0.000.05），组内多重比较，SKOV3与SKOV3/vector、SKOV3/IL-17D与SKOV3/CDDP比较差异无统计学意义（P0.05），其余各组间比较差异均有统计学意义（P0.05）。 OVCAR3组：组间比较差异有统计学意义（F=1032.37，P=0.000.05），组内比较：OVCAR3与OVCAR3/vector比较差异无统计学意义（P0.05），其余各组间比较差异均有统计学意义（P0.05）。 结果显示：IL-17D转染后细胞表面MICA的表达较转染前降低；SKOV3/CDDP耐药株细胞表面MICA表达量低于亲本细胞株。 结论： 1我们可以在体外获得IL-17D特异性表达的人卵巢癌细胞株。 2人卵巢浆液性乳头状腺癌的耐药细胞SKOV3/CDDP内IL-17D的表达量远高于其亲本细胞SKOV3，推测IL-17D可能与细胞耐药性有关，其机制有待进一步探讨。 3转染IL-17D后的细胞增殖速度明显加快，推测IL-17D可能具有促进瘤细胞生长作用；且IL-17D表达量较高的细胞都伴随着其表面MICA表达的下降，细胞表面MICA的下调可导致NK细胞对癌细胞的杀伤作用减弱，从而为今后探讨卵巢癌的靶向治疗及免疫逃逸提供理论依据。
[Abstract]:Objective: to establish a human epithelial ovarian cancer cell line that can express and secrete IL-17D by gene transfection. By detecting the difference of IL-17D expression in ovarian cancer cells before and after gene transfection and the effect of exogenous IL-17D transfection on the NKG2D ligand MICA on the surface of ovarian cancer cells, IL-17D has been explored for human ovarian cancer cells and inherent immunity. In vitro influence.
Method锛

本文编号：2004998