上调胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1对子宫内膜癌细胞系HEC-1A生物学功能的影响

发布时间：2018-06-13 11:22

  本文选题：子宫内膜肿瘤 + 胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1　； 参考：《郑州大学》2014年硕士论文

【摘要】：背景与目的 近些年来子宫内膜腺癌的发病率逐年上升。肥胖，高血压，糖尿病和血脂异常的多种危险因素共同构成的代谢综合征与子宫内膜腺癌的发病密切相关。而胰岛素抵抗是代谢综合征的中心环节。胰岛素样生长因子结合蛋白(insulinlike growth factor binding proteins，IGFBPs)是胰岛素样生长因子(insulin-1ikegrowth factor，IGF)体系中的重要成员，其中包括与IGF有较高的结合能力的IGFBP1-6，及新近发现的与胰岛素有较高结合能力的IGFBP7-15，又被称为胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白(insulin like growth factor binding protein-relatedprotein，IGFBP-rP)，其中研究最多最重要的是lGFBP-rP1，与IGFBP1-6相比，lGFBP-rP1与IGF1和IGF2的结合能力分别要弱5倍和20-25倍，但与胰岛素的结合能力要强500倍。胰岛素和IGFBP-rP1结合后使胰岛素降低或丧失正常生理作用，导致机体胰岛素敏感性下降，引起胰岛素抵抗，，从而参与一些恶性肿瘤如结肠癌、乳腺癌等的发生发展，并且高胰岛素血症和低IGFBP-rP1水平是子宫内膜癌的高危因素。但是lGFBP-rP1在子宫内膜癌细胞发挥何种作用尚不清楚，因此，本研究应用脂质体介导的基因转染方法将重组质粒pEX-2 IGFBP-rP1转染lGFBP-rP1低表达的子宫内膜癌细胞系HEC-1A，观察上调lGFBP-rP1对子宫内膜癌细胞系HEC-1A的增殖速率，凋亡及细胞周期的影响，探讨lGFBP-rP1在子宫内膜癌中发挥的具体作用。 方法 1.细胞转染：应用脂质体介导的基因转染方法将重组质粒转染子宫内膜癌细胞系HEC-1A，分为三组：转染pEX-2 IGFBP-rP1组、转染空质粒组、空白对照组（仅转染试剂），并用荧光显微镜观察转染效率； 2.应用QRT-PCR技术检测各组细胞中IGFBP-rP1的RNA表达； 3.应用蛋白印迹法（Western Blot）测定各组细胞IGFBP-rP1蛋白表达； 4.应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法分别检测各组细胞24h、48h、72h增殖抑制率； 5.采用流式细胞技术应用AnnexinV-APC/PI双染法测定各组细胞的凋亡率。采用PI单染法测定各组细胞的细胞周期； 6.统计学方法：应用SPSS16.0软件进行数据统计分析，所得结果以X±s表示。采用重复测量的方差分析来比较各组细胞的增殖抑制率，用单因素方差分析比较各组细胞的mRNA，蛋白表达，细胞凋亡率和细胞周期，两两比较采用LSD法。 结果 1.转染pEX-2 IGFBP-rP1组IGFBP-rP1mRNA的相对拷贝量为：2.699±0.293，蛋白相对表达量为：1.126±0.074与转染空质粒组（1.296±0.169，0.889±0．040）及空白对照组（1.031±0.301，0.884±0.043）相比明显升高，且差异有统计学意义(p＜0.01）； 2.转染pEX-2 IGFBP-rP1组24h，48h，72h增殖抑制率分别为：(37.3±5.4)%、(39.9±4.7)%、(38.0±5.3)%，与转染空质粒组（3.6±0.6）%，(4.0±0.5)%，(3.3±0.6）%和空白对照组（2.7±0.3）%，(3.2±0.2)%，(2.4±0.2）%相比，增殖抑制率明显上升，且差异均有统计学意义(p＜0.01)； 3.转染后48h，转染pEX-2 IGFBP-rP1组凋亡率为（20.667±2.055）％，明显高于转染空质粒组（3.967±0.351）％及空白对照组（4.967±0.252）％，差异有统计学意义（p0．01）； 4.转染pEX-2 IGFBP-rP1组S+G2／M期细胞的比例为：（30.980±1.461）％，明显低于转染空质粒组（38.797±2.419）％和空白对照组(37.800±0.350)％，差异有统计学意义（p0．01)。 结论 上调人子宫内膜癌细胞HEC-1A中IGFBP-rP1的表达，可以抑制该细胞系的增殖，促进其凋亡，引起细胞周期阻滞。
[Abstract]:Background and Purpose

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本文编号：2013863