IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17、IL-1β基因甲基化与子宫颈癌的相关性

发布时间：2018-06-23 05:56

  本文选题：宫颈癌 + IFN-γ　； 参考：《河北医科大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的：炎性细胞因子的异常表达在宫颈癌的发生、发展中起重要作用，DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰，主要发生在基因启动子区的CpG序列中胞嘧啶碱基，能直接抑制基因的转录活性，从而影响基因的表达。本研究采用甲基化特异性PCR法（MSP）研究子宫颈癌中IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17、IL-1β基因启动子区CpG岛的甲基化状态，反转录-PCR法（RT-PCR）半定量检测其表达，旨在探讨IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17、IL-1β基因启动子区甲基化状态对其表达情况的影响，从而探讨DNA甲基化异常在子宫颈癌发生发展中的作用，为子宫颈癌发生风险的评估、诊断和治疗提供新的科学依据。 方法： 1采用MSP法检测2012年3月-2013年3月从唐山工人医院妇产科门诊和住院部收集的43例正常宫颈组织、62例宫颈上皮内瘤变（CIN）组织（其中CINⅠ23例，CINⅡ-Ⅲ39例）和43例宫颈癌组织中IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17、IL-1β基因启动子区的甲基化状态。 2采用RT-PCR法进行半定量检测不同宫颈组织中IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17、IL-1β基因的mRNA表达水平，分析不同基因启动子区甲基化状态对其mRNA表达的影响以及与不同临床病理特征之间的关系。 3数据分析采用SPSS16.0软件，双变量相关性分析采用Spearman秩相关系数，各组间甲基化率的比较行卡方检验或Fisher确切概率法，Bonferroni校正法调整检验水准。PCR半定量检测mRNA相对表达量原始数据处理采用单因素方差分析和独立样本t检验。双侧检验P＜0.05认为差异有统计学意义。 结果： 1IFN-γ基因甲基化率在对照组（4.65%）、CINⅠ组（3.04%）、CINⅡ-Ⅲ组（15.38%）和宫颈癌组（20.93%）依次呈上升趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）。CINⅡ-Ⅲ组和宫颈癌组IFN-γ mRNA的表达均低于对照组（0.71±0.35、0.60±0.29vs0.93±0.43，P＜0.05），宫颈癌组低于CINⅠ组（0.60±0.29vs0.81±0.36，P＜0.05）；IFN-γ mRNA在甲基化组的表达低于非甲基化组（0.28±0.24vs0.83±0.34，P＜0.05），甲基化和mRNA表达之间呈负相关，但无统计学意义（rs=-0.155，P＞0.05）。 2TNF-α基因在CINⅡ-Ⅲ组及宫颈癌组的甲基化率显著低于对照组（15.4%、9.3%vs48.8%，P＜0.05）。mRNA相对表达量在对照组（0.46±0.18）、CINⅠ组（0.69±0.15）、CINⅡ-Ⅲ组（0.85±0.17）及宫颈癌组（0.96±0.17）依次呈上升趋势（P＜0.05）； mRNA在甲基化组的表达显著低于非甲基化组（0.44±0.17vs0.85±0.20，P＜0.05），甲基化和mRNA表达之间呈负相关（rs=-0.411，P＜0.05）。 3IL-4基因甲基化率在不同组分别为：对照组7.0%、CINⅠ组17.4%、CINⅡ-Ⅲ组17.9%和宫颈癌组23.3%,差异无统计学意义（P＞0.05）。mRNA相对表达量在对照组为0.28±0.24、CINⅠ组0.47±0.20、CINⅡ-Ⅲ组0.69±0.27及宫颈癌组0.85±0.18呈上升趋势（P＜0.05）。IL-4mRNA在甲基化组的表达低于非甲基化组（0.40±0.25vs0.62±0.32，P＜0.05），甲基化和mRNA表达之间呈负相关（rs=-0.258，P＜0.05），但相关性弱。 4IL-17基因甲基化率在CINⅡ-Ⅲ和宫颈癌组显著低于对照组（53.8%、46.5%vs83.7%，P＜0.05）。宫颈组织中IL-17mRNA的相对表达水平在宫颈癌组、CINⅡ-Ⅲ组和CINⅠ组显著高于对照组（0.76±0.29、0.70±0.19、0.62±0.26vs0.50±0.18，P＜0.05），但三组之间差别不大。IL-17mRNA在甲基化组的表达低于非甲基化组（0.52±0.16vs0.90±0.17，P＜0.05），甲基化和mRNA表达之间呈负相关（rs=-0.627，P＜0.05）。 5IL-1β基因在宫颈癌组、CINⅡ-Ⅲ组的甲基化率低于对照（32.6%、48.7%vs81.4%，P 0.05），宫颈癌组低于CINⅠ组（32.6%vs69.6%，P0.05）。宫颈癌组、CINⅡ-Ⅲ组IL-1β基因mRNA的相对表达显著高于CINⅠ组、对照组（0.90±0.35、0.80±0.35vs0.60±0.29、0.49±0.26，P 0.05），IL-1β mRNA在甲基化组的表达低于非甲基化组（0.46±0.21vs1.03±0.23，P＜0.05），甲基化和mRNA表达之间呈负相关（rs=-0.653，P 0.05）。 6在宫颈癌组，IL-17基因甲基化率在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期的宫颈癌组织中分别为64%、27.3%、14.3%，具有显著性差异（P0.05），而IL-17基因甲基化率在不同年龄段、不同病理分级，及IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-1β在不同年龄、病理分级和临床分期无差异（P0.05）。 结论： 1TNF-α、IL-17、IL-1β基因启动子区甲基化水平的降低是导致TNF-α、IL-17、IL-1β基因mRNA表达升高的原因之一，参与宫颈癌的发生、发展。 2IFN-γ mRNA的低表达和IL-4mRNA高表达是宫颈癌发生、发展的原因之一。 3宫颈癌患者中，，IL-17基因甲基化状态与宫颈癌临床分期有关，即IL-17的低甲基化促进宫颈癌病情进展。
[Abstract]:Objective: the abnormal expression of inflammatory cytokines plays an important role in the development of cervical cancer. DNA methylation is an important epigenetic modification, which mainly occurs in the CpG sequence of the gene promoter region, which can directly inhibit the transcriptional activity of the gene and thus affect the gene expression. This study uses the methylation specificity. The methylation status of IFN- gamma, TNF- alpha, IL-4, IL-17, IL-1 beta gene promoter CpG island in cervical cancer was studied by sexual PCR method (MSP), and the reverse transcriptional -PCR method (RT-PCR) was used to detect its expression. The role of cervical cancer in the development and development of cervical cancer risk assessment, diagnosis and treatment to provide new scientific basis.
Method:
1 MSP was used to detect 43 normal cervical tissues, 62 cases of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) tissue (of which CIN I 23 cases, CIN II - III 39 cases) and 43 cases of cervical cancer tissue, IFN- gamma, TNF- a, IL-4, IL-17, IL-1 beta gene promoter methylation status in March March 2012, which were collected from the Department of Obstetrics and Gynecology, obstetrics and Gynecology and obstetrics and Gynecology of Tangshan workers' hospital.
2 the level of mRNA expression of IFN- gamma, TNF- alpha, IL-4, IL-17, IL-1 beta gene in different cervical tissues was semi quantified by RT-PCR method, and the effect of methylation status on the expression of mRNA in different promoter regions and the relationship with different clinicopathological features were analyzed.
3 data analysis uses SPSS16.0 software, bivariate correlation analysis uses Spearman rank correlation coefficient, the comparison of methylation rates among each group is chi square test or Fisher exact probability method, Bonferroni calibration method adjusts test level.PCR semi quantitative detection mRNA relative expression of original data, single factor variance analysis and independent sample t test are used. Double test P < 0.05. The difference was statistically significant.
Result锛

本文编号：2056097