TLR4通过miR-21靶向调控卵巢癌增殖和侵袭的作用机制研究

发布时间：2018-07-08 10:32

本文选题：卵巢癌 + miR-21　；参考：《安徽医科大学》2016年博士论文

【摘要】：背景:卵巢癌是世界范围内常见的妇科恶性肿瘤之一,该病的病情发展迅速,每年约有140000例患者因卵巢癌导致死亡。由于患者在患病之初没有任何明显症状,同时还缺少有效的检测手段,因此约75%的患者在就诊时已属晚期。而在近年来的大量的研究之中,有关的研究人员已在其中得知miRNA参与许多的恶性肿瘤产生与其发展进程,具有类似癌基因或者抑癌基因的功能。有报道表明,一些miRNA对肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移等存在异常调节,其中亦包括卵巢癌。TLRs是一类高度保守的模式识别受体,介导着机体的损伤修复,当TLRs的信号被过度活化或活化不足的时候,就会导致机体功能出现异常表现,严重时会造成一些肿瘤的产生。炎症通常是肿瘤产生与其发展的关键因素之一,这也是肿瘤免疫微环境的主要特征,而恶性肿瘤本身即是机体异常损伤的过程。TLR4是Toll样受体家族中的一个成员,为一类固有免疫分子,其在多种恶性肿瘤细胞中存在高表达,与肿瘤细胞的凋亡过程具有十分密切的关系。目的:本研究拟观察miR-21在卵巢癌组织中的表达及意义,分析miR-21表达变化对卵巢癌细胞凋亡和增殖的影响,并探究TLR4信号活化对卵巢癌细胞中的miR-21表达的调控作用,以及其对卵巢癌细胞生物学行为的影响,旨在为了解炎症相关肿瘤的发生机制并为卵巢癌的临床诊断及靶向治疗提供可靠依据。方法:(1)采用实时荧光定量PCR的方法检测卵巢癌患者癌组织及其相应正常卵巢组织中miR-21和TLR4 m RNA的表达情况;采用western blot法检测卵巢癌组织及其相应正常卵巢组织中TLR4蛋白的表达情况;并分析卵巢癌患者癌组织中miR-21和TLR4 m RNA的表达与患者临床病理参数的相关性。(2)将miR-21 mimic转染卵巢癌SKOV-3细胞以增强细胞中miR-21的表达;检测转染后SKOV-3细胞中miR-21的表达情况;MTT法分别检测转染后24、48、72和96小时卵巢癌细胞SKOV-3的增殖情况;Annexin V-fitc/pi双染色及流式细胞仪分别检测转染后0、24、48、72、96小时时卵巢癌细胞SKOV-3的凋亡情况;Transwe II小室法对转染后的SKOV-3细胞侵袭能力的情况进行测定。(3)以TLR4配体LPS刺激卵巢癌SKOV-3细胞6、12、18、24小时,采用实时荧光定量PCR检测SKOV-3细胞中miR-21的表达变化情况;Western blot法检测TLR4信号活化后SKOV-3细胞中NF-κBp65的表达和磷酸化情况;应用NF-κB抑制剂PDTC处理经LPS刺激后的SKOV-3细胞30分钟,实时荧光定量PCR检测SKOV-3细胞中miR-21的变化情况;转染miR-21抑制剂和阴性对照后,Annexin-V/PI双标法检测SKOV-3细胞凋亡情况;MTT法检测SKOV-3细胞增殖情况;Transwe II小室法检测SKOV-3细胞的侵袭能力。结果:(1)miR-21在卵巢癌组织中的表达显著高于其在相应正常卵巢组织中的表达(P0.01);TLR4 m RNA及其蛋白在卵巢癌组织中的表达显著高于其在相应正常卵巢组织中的表达(P0.01);miR-21和TLR4 m RNA的表达与卵巢癌组织学分级和淋巴结转移密切相关。(2)转染miR-21 mimic后SKOV-3细胞中的miR-21含量显著升高(P0.05);miR-21能够促进SKOV-3细胞的增殖,抑制其凋亡,同时还能提高其侵袭能力。(3)LPS刺激致TLR4信号活化能够时间依赖性地上调miR-21的表达(P0.05);TLR4信号能够时间依赖性地上调NF-κB的活化,NF-κB抑制剂PDTC能明显抑制TLR4信号诱导的SKOV-3细胞的miR-21上调(P0.05);与阴性对照组相比,miR-21抑制剂组SKOV-3细胞的凋亡率明显增高(P0.05);SKOV-3细胞的增殖能力明显降低(P=0.0350.05);miR-21表达受抑制后使SKOV-3细胞的侵袭能力较对照组显著降低(P0.05)。结论:(1)miR-21和TLR4 m RNA在卵巢癌组织中呈高表达,且与患者的卵巢癌组织学分级和淋巴结转移密切相关;(2)miR-21能促进卵巢癌SKOV-3细胞的增殖和侵袭,并抑制其凋亡;(3)TLR4信号通路的活化能够上调卵巢癌SKOV-3细胞中miR-21的表达,其机制与NF-κB的活化有关;抑制miR-21的表达促进了SKOV-3细胞的凋亡、降低了其增殖能力与侵袭能力。
[Abstract]:BACKGROUND : Ovarian cancer is one of the most common gynecological malignant tumors in the world . The disease is developing rapidly . There are about 140000 patients with ovarian cancer due to ovarian cancer . The expression of miR - 21 in SKOV - 3 cells was significantly higher than that in control group ( P0.05 ) .
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31

【参考文献】