Vasohibin-1重组腺病毒对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖及凋亡的体外研究

发布时间：2018-07-14 11:47

【摘要】：背景、目的：卵巢癌因早期临床表现不明显,缺乏有效的早期筛查的方法,当诊断时多已发展至晚期。尽管卵巢癌的肿瘤减灭术及以铂类、紫杉醇的联合化疗有效的提高了卵巢癌的预后,仍有约70%的患者在2年内复发,而这些Ⅲ/Ⅳ期复发的患者5年生存率仅为23%。因此,新的、有效的治疗卵巢癌的方法十分急需。本研究为明确内源性血管生成抑制因子vasohibin-1对人卵巢癌SKOV-3细胞体外增殖和凋亡能力的影响,以期为卵巢癌的治疗提供新的思路。 方法：细胞培养,SKOV-3细胞用含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的RPMI-1640培养液培养,培养瓶置于37℃、5%C02培养箱中,细胞呈单层贴壁生长,选用对数生长期细胞进行实验。(1)以不同的病毒感染复数(multiplicity of infection,MOI),即MOI=25、50、75、100,用重组腺病毒vasohibin-1(Ad-vasohibin-1)感染SKOV-3细胞,于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况及细胞形态,绿色荧光消失的时间,计算感染率,确定病毒最佳MOI；(2)当MOI=50、75、100,用Ad-vasohibin-1感染SKOV-3细胞,分别于感染后24h及48h,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况并拍照。(3)按所确定的最佳MOI,MOI=75,用Ad-vasohibin-1感染SKOV-3细胞,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测SKOV-3细胞内vasohibin-1蛋白的表达水平；(4)利用Cell Count Kit-8(CCK-8)检测Ad-vasohibin-1对SKOV-3细胞增殖的影响,取不同的MOI,即MOI=25、50、100、200,分别培养24h、48h和72h。(5)利用Hoechst33258检测Ad-vasohibin-1对SKOV-3细胞凋亡的影响。 结果：(1)MOI=25、50、75、100,病毒感染SKOV-3细胞24h,可以观察到绿色荧光；48h荧光达到最亮,且随着MOI值增大绿色荧光增强,MOI=100时,部分细胞出现较明显的死亡；荧光持续10天消失；(2)MOI=50、75、100,病毒感染SKOV-3细胞,见绿色荧光强度随感染时间延长和MOI增大而增强；(3)经腺病毒感染48h后,SKOV-3细胞中vasohibin-1蛋白表达量与对照组相比,显著性增加(P0.05)；(4)CCK-8检测发现vasohibin-1重组腺病毒对SKOV-3细胞增殖具有抑制作用,MOI=25时vasohibin-1重组腺病毒感染SKOV-3细胞24h,与对照组相比,没有统计学差异(P=0.065)；余各组间相比均具有统计学意义(P0.05),且抑制能力随MOI增大而增加(P0.05),随时间的延长而增加(P0.05)。(5)Hoechst33258染色观察到Ad组的SKOV-3细胞较NC组及BC组细胞核体积缩小,染色质浓染,亮度明显增强,核碎裂,呈致密的颗粒状或块状,出现较多的核固缩和碎裂。 结论：Vasohibin-1可以在SKOV-3细胞中过表达,其过表达能够抑制SKOV-3细胞的增殖能力,并具有浓度和时间依赖性,同时能诱导SKOV-3细胞的凋亡,可为卵巢癌的治疗提供新思路。
[Abstract]:Background, objective: because the early clinical manifestation is not obvious, the ovarian cancer lacks the effective early screening method, when the diagnosis has developed to the late stage. In spite of tumor reduction and platinum chemotherapy, paclitaxel can effectively improve the prognosis of ovarian cancer. About 70% of the patients recurred within 2 years, while the 5-year survival rate of these patients with stage 鈪，

本文编号：2121550