PEITC经核输出蛋白和mTOR-STAT3信号通路介导的抑制卵巢癌侵袭、转移的机制研究

发布时间：2018-10-20 11:42

【摘要】：卵巢癌发病率位居女性生殖系统恶性肿瘤第三位,起病隐匿,诊断时多数已到晚期,病死率高,治疗后易复发,容易产生化疗耐药,预后差。阐明卵巢癌发生发展的分子机制、筛选异常表达的分子靶点、寻找有效的靶向抑制剂是目前分子靶向精准治疗的趋势,也是改善卵巢癌预后的研究方向。异硫氰酸苯乙酯(PEITC)为从十字花科植物中提取的天然化合物,研究显示PEITC可抑制多种恶性肿瘤细胞的增殖、促进凋亡、诱导周期阻滞等,但对于其抑制肿瘤侵袭、转移方面的研究较少,目前尚无PEITC抑制卵巢癌侵袭、转移的相关报道。本课题研究了PEITC抑制卵巢癌细胞侵袭、转移功能及潜在的分子机制,并首次在卵巢癌动物模型中研究了PEITC抗卵巢癌侵袭、转移的作用,同时测定卵巢癌组织中CRM1和mTOR表达水平,以期寻找卵巢癌治疗的分子靶点,并寻求PEITC抑制卵巢癌转移的分子机制,为卵巢癌治疗提供新的有效的可选药物。目的:1.测定上皮性卵巢癌组织中CRM1和mTOR的表达水平,分析二者表达有无相关性,并分析二者与临床特征、预后之间的关系。2.探讨PEITC抑制卵巢癌细胞侵袭、转移能力的分子机制。方法:1.免疫组化方法测定40例上皮性卵巢癌组织和10例卵巢良性肿瘤组织中CRM1和mTOR的表达水平,分析二者之间有无相关性,并分析二者表达水平与卵巢癌分型、FIGO分期、病理分级等因素的相关性,应用Cox回归模型分析CRM1和mTOR表达与患者预后的关系;测定卵巢癌细胞系中CRM1和mTOR的转录和翻译水平,分析其是否可作为卵巢癌靶向治疗的靶点。2.表型研究:将5μM和10μM PEICT分别作用于卵巢癌细胞系SKOV3和HO8910,通过划痕愈合实验、Transwell迁移及侵袭实验验证细胞的侵袭、转移能力变化。将用荧光素酶标记的SKOV3细胞异种移植入裸鼠腹腔,建立动物模型,模拟人卵巢癌腹腔转移过程,并给予10μmol PEITC灌胃6周干预,通过活体成像实验观察腹腔转移瘤成瘤情况。3.机制研究:不同浓度PEICT作用于卵巢癌细胞系一定时间(24、48小时)后,测定细胞内CRM1、mTOR-STAT3信号通路相关蛋白表达水平(转录和翻译水平)及亚细胞分布改变(细胞免疫荧光法),阐明PEITC抑制卵巢癌侵袭、转移的机制。结果:1.CRM1在上皮性卵巢癌组织中的表达较良性肿瘤组织显著升高,与肿瘤FIGO分期、卵巢癌分型、术后生存期相关;mTOR在上皮性卵巢癌组织中的表达较良性肿瘤组织显著升高,与肿瘤FIGO分期、卵巢癌分型、术前腹水有无癌细胞、术后生存期相关;CRM1和mTOR表达水平有相关性,相关系数r=0.418;COX回归模型分析显示影响上皮性卵巢癌术后生存期的因素有:FIGO分期、卵巢癌分型以及癌组织中mTOR表达水平,均为危险因素;CRM1和mTOR在卵巢癌细胞中表达升高,其中尤以HO8910和SKOV3中表达升高为著;2.PEITC抑制卵巢癌细胞系SKOV3和HO8910的增值、侵袭和转移能力,并呈浓度依赖性;动物体内实验显示PEITC抑制卵巢癌移植瘤的侵袭和转移能力;3.PEITC抑制卵巢癌细胞中CRM1和mTOR的转录和翻译水平,并可抑制CRM1的出核转运功能,使得货物蛋白mTOR聚集于核内;同时抑制mTOR-STAT3信号通路相关蛋白表达,执行蛋白MMP2和MMP9表达降低。结论:1.CRM1和mTOR在卵巢上皮癌中的表达升高,与肿瘤生存期相关,可做为卵巢癌药物治疗的分子靶点;2.PEITC可降低卵巢癌细胞中CRM1和mTOR表达,并可抑制卵巢癌细胞的侵袭、转移能力,可能的机制为PEITC抑制CRM1出核转运功能和抑制mTOR-STAT3信号通路。
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【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31

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