MALAT1对宫颈癌细胞生物学表型的影响

发布时间：2018-11-08 18:54

【摘要】：研究背景与目的 近年来,宫颈癌发病率在某些地区有明显上升趋势,且患者年轻化趋势越来越明显。目前已明确宫颈癌的发生与人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的持续感染相关,但有研究表明年轻妇女的HPV感染通常是一过性的,因此,在宫颈癌早期筛查中HPV检测实验不能很好的鉴别静止和持续感染,再加上目前宫颈癌手术、放疗和化疗存在一定局限性,研究宫颈癌的发生发展机制,寻找新的能够用于治疗和病情监测指标的靶分子成为亟待解决的重大问题。 lncRNA是近年研究发现的在表观遗传水平、转录水平和转录后水平调控基因的表达并广泛参与几乎所有生理和病理过程的一类非编码RNA。实验室前期在太空诱变宫颈癌细胞中筛选获得一个表达上调的长片段非编码RNA基因MALAT1,MALAT1是定位于染色体11q13,核酸序列为8708bp,在多种肿瘤中被异常调控,与多种肿瘤的发生发展密切相关,但MALAT1与宫颈癌的关系目前还未见其他实验室有相关报导。本课题拟通过RT-PCR方法检测MALAT1在宫颈癌细胞系和宫颈上皮细胞样本中的表达；用RNA沉默技术和过表达技术分别构建干扰和过表达MALAT1的稳定细胞系,从正反两方面研究MALAT1对宫颈癌细胞生物学表型的影响；在此基础上进一步对MALAT1影响宫颈癌细胞增殖的下游信号分子进行探索。方法 1.收集宫颈癌细胞系和宫颈上皮细胞样本,提取RNA后,用RT-PCR的方法检测MALAT1的表达,分析MALAT1的表达与宫颈癌的相关性。 2.用MALAT1过表达载体pEGFP-C1转染laCat细胞和SiHa细胞,用MALAT1沉默载体pRNAT-U6.1/Neo转染CaSki细胞,通过G418筛选和有限稀释法建立稳定的阳性细胞株。细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕修复实验和Transwell实验检测MALAT1对宫颈癌细胞生物学表型的影响。 3.通过流式细胞术检测MALAT1改变后细胞周期的变化,用RT-PCR的方法检测影响细胞周期的相关分子,分析MALAT1调控细胞增殖的相关分子。结果 1.MALAT1高表达于宫颈癌细胞系Hela、CaSki、SiHa、HCC94和宫颈病变上皮细胞样本中,而在正常细胞HaCat和正常宫颈上皮细胞样本中未检测到MALAT1的表达,表明MALAT1与宫颈癌的发生发展存在相关性。 2.经双酶切和测序鉴定,成功构建MALAT1过表达载体pEGFP-C1/M1,将沉默载体和过表达载体分别转染细胞后,成功建立MALAT1沉默和过表达稳定细胞系；沉默MALAT1后,宫颈癌细胞生长速度减慢,克隆形成能力降低,细胞迁移能力下降；过表达MALAT1后细胞生长未出现明显变化,细胞迁移能力增强。 3. MALAT1沉默后,G1期细胞增多,S期细胞减少,细胞周期蛋白cyclinD1、cyclinE、细胞周期蛋白依赖激酶CDK6表达明显降低,CDK4没有明显变化,表明MALAT1通过调控G1/S期相关分子的表达影响宫颈癌细胞增殖。结论 1. MALAT1在宫颈癌中高表达,与宫颈癌发生相关。 2. MALAT1在宫颈癌细胞生长和转移中起促进作用。 3. MALAT1通过改变周期相关分子的表达调控宫颈癌细胞增殖。
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【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.33

【共引文献】

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本文编号：2319363