白假丝酵母菌最优化RNA提取策略的探索

发布时间：2018-11-18 07:34

【摘要】：目的探索白假丝酵母菌总RNA简单、快捷、高效的提取方法。方法选取昆明医科大学第一附属医院妇产科门诊2011年7月—2013年3月有临床症状且阴道分泌物镜检阳性的外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)患者的白假丝酵母菌40株,选用不同时间与温度组合下的4种溶壁酶(Lyticase)破壁方案(A方案:37℃、12 h,B方案:25℃、12 h,C方案:37℃、24 h,D方案:25℃、24 h)进行RNA提取,将所得RNA进行荧光定量PCR(q PCR)反应验证RNA的浓度及纯度,并进行管家基因18S rRNA的检测。结果 D方案提取获得的RNA浓度高于A、B、C方案(P0.05);B方案提取获得的RNA浓度高于A、C方案(P0.05);而A、C两方案提取获得的RNA浓度比较,差异无统计学意义(P0.05)。B、D方案获得的RNA纯度高于A、C方案(P0.05);但A、C方案获得的RNA纯度比较,差异无统计学意义(P0.05);B方案提取获得的RNA纯度高于D方案(P0.05)。A、B、C、D方案提取的RNA扩增产物Ct转化值比较,差异有统计学意义(P0.05);其中B、D方案q PCR扩增产物Ct转化值高于A、C方案(P0.05);但B、D方案及A、C方案之间的q PCR扩增产物Ct转化值比较,差异无统计学意义(P0.05)。管家基因18S rRNA的引物扩增出的产物片段大小为150 bp。结论以Lyticase破壁提取白假丝酵母菌具有简单易行及RNA产量高、纯度好的优点,值得临床推广应用。
[Abstract]:Objective to explore a simple, fast and efficient method for extracting total RNA from Candida albicans. Methods from July 2011 to March 2013, 40 strains of Candida albicans from (VVC) patients with vulvovaginal candidiasis were selected from gynecology and obstetrics outpatient of the first affiliated Hospital of Kunming Medical University. Four kinds of wall breaking schemes (A: 37 鈩，

本文编号：2339332