miR-183表达失衡诱导子宫内膜细胞抵抗失巢凋亡的作用及分子机制研究

发布时间：2018-12-13 15:25

【摘要】：目的：探讨子宫内膜异位症（Endometriosis,EMT）患者在位和异位子宫内膜细胞中miR-183的表达差异，探究miR-183可能的靶基因，筛选特定靶基因进行初步验证，深入分析miR-183及其靶基因调控子宫内膜细胞失巢凋亡的分子机制，以期进一步揭示子宫内膜异位症的发病机理。 方法:①收集新鲜未经治疗的EMT患者在位子宫内膜组织和异位病灶及无EMT患者的子宫内膜作为对照组织标本；②采用苏木素-伊红染色（HE染色）对实验组（31例EMT在位内膜以和异位病灶）和对照组（32例无子宫内膜异位症患者的子宫内膜）进行形态学研究，TUNEL染色和线粒体活性氧检测检测组织标本细胞凋亡情况，并比较分析组间凋亡指数（apoptosis index，AI）；③采用Real time PCR检测两组内膜标本中miR-183的表达情况，并分析组间表达差异；④利用生物信息学技术，联合TargetScans，miRanda，PicTar三个数据库预测miR-183的靶基因，选择靶基因EGR1进行初步验证，，采用Real time PCR法检测两组标本中miR-183靶基因EGR1的表达情况。 结果:①TUNEL染色结果：EMT组异位病灶组织细胞AI低于在位子宫内膜和对照组子宫内膜，差异具有统计学意义（p 0.05）；EMT组在位子宫内膜组织细胞的AI与对照组子宫内膜的AI差异无统计学意义（p0.05）；②线粒体活性氧族检测结果：EMT异位病灶组织线粒体的荧光强度达低于EMT在位内膜和对照组内膜，差异具有统计学意义(p0.05)；③miR-183在EMT组的异位病灶的表达低于在位和对照组子宫内膜，差异具有统计学意义（p0.05）；miR-183在EMT患者在位子宫内膜与对照组子宫内膜的表达差异无统计学意义（p0.05）；④靶基因EGR1在EMT组异位病灶表达高于EMT组在位内膜和对照组子宫内膜，差异具有统计学意义（p0.05）；靶基因EGR1在EMT组在位子宫内膜与对照组子宫内膜的表达差异无统计学意义（p0.05）。 结论：EMT患者异位病灶组织细胞的miR-183表达显著下调，在位内膜组织细胞miR-183的表达无显著变化，并且异位病灶组织细胞的靶基因EGR1表达显著上调，这说明失巢后的病灶组织细胞削弱了其对靶基因EGR1的负性调控作用，导致EGR1在EMT异位病灶组织细胞表达上调，进而诱发失巢的子宫内膜细胞产生抵抗失巢凋亡的能力，使子宫内膜细胞在盆腔内种植，并形成相应病灶，引发一系列临床症状。
[Abstract]:Objective: to investigate the difference of miR-183 expression between eutopic and ectopic endometrial cells in patients with endometriosis (Endometriosis,EMT), explore the possible target genes of miR-183, and screen specific target genes for preliminary verification. To analyze the molecular mechanism of miR-183 and its target gene regulating endometrial cell apoptosis in order to reveal the pathogenesis of endometriosis. Methods: 1 the eutopic endometrium and ectopic endometrium of EMT patients and the endometrium without EMT were collected as control tissues. 2Morphology was studied by hematoxylin eosin staining (HE staining) in the experimental group (31 patients with eutopic endometrium and ectopic lesions of EMT) and in the control group (32 patients without endometriosis). TUNEL staining and mitochondrial reactive oxygen species (Ros) were used to detect the apoptosis of tissue samples and to compare the apoptotic index (apoptosis index,AI) between the two groups. 3The expression of miR-183 was detected by Real time PCR, and the difference between the two groups was analyzed. 4 the target gene of miR-183 was predicted by bioinformatics combined with three databases of TargetScans,miRanda,PicTar, and the target gene EGR1 was selected for preliminary verification. The expression of miR-183 target gene EGR1 was detected by Real time PCR method in two groups of samples. Results: the results of 1TUNEL staining showed that the AI of ectopic focus tissue cells in EMT group was lower than that in eutopic endometrium and control group (p0.05). There was no significant difference in AI between EMT group and control group (p0.05). 2 the results of reactive oxygen species in mitochondria: the fluorescence intensity of mitochondria in the ectopic lesion of EMT was lower than that in the eutopic endometrium of EMT and that in the control group (p0.05). The expression of 3miR-183 in ectopic lesions in EMT group was significantly lower than that in eutopic endometrium and control group (p0. 05). There was no significant difference in the expression of miR-183 between the eutopic endometrium of EMT patients and the control group (p0.05). 4the expression of target gene EGR1 in ectopic focus of EMT group was higher than that in eutopic endometrium of EMT group and control group (p0.05). There was no significant difference in the expression of target gene EGR1 between the eutopic endometrium of EMT group and the control group (p0.05). Conclusion: the expression of miR-183 in ectopic tissue cells of EMT patients was significantly down-regulated, while the expression of miR-183 in eutopic endometrial tissues was not significantly changed, and the expression of target gene EGR1 was significantly up-regulated in ectopic lesion tissue cells. These results suggest that the negative regulation of target gene EGR1 is weakened by the loss of nesting tissue cells, which leads to the up-regulation of EGR1 expression in EMT ectopic tissue cells, which in turn induces the ability of endometrial cells losing their nests to resist apoptosis. The endometrial cells were implanted in the pelvis and the corresponding lesions were formed, causing a series of clinical symptoms.
【学位授予单位】：广州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R711.71

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 陈珉媛;秦莉花;李晟;王若光;李春梅;;脂多糖对人子宫内膜细胞活力、周期及凋亡率的影响[J];医学临床研究;2007年09期

2 秦莉花;王若光;李晟;李春梅;谭运福;;脂多糖对子宫内膜细胞的炎症相关基因表达的影响[J];生殖与避孕;2009年04期

3 唐莉;黄荷凤;张云霞;马艳萍;周彩云;;子宫内膜异位症患者子宫内膜细胞与正常人子宫内膜细胞体外生长特性的比较[J];中外医疗;2009年15期

4 ;人体子宫内膜细胞离体培养和染色体的制备[J];浙江医科大学学报;1982年S1期

5 赵昀 ,张宏,李亚里,魏丽惠,田方,关铮;子宫内膜细胞的培养和侵袭性研究[J];解放军医学杂志;2003年05期

6 殷莉,何主强,钟刚;骨桥蛋白在子宫内膜细胞的多因素调节[J];实用医学杂志;2005年09期

7 刘晓瑷,朱岩平,金毓翠;消炎痛对人子宫内膜细胞摄取前列腺素E_2的影响[J];生殖与避孕;1989年04期

8 宿爱琴,涂持坤,张玉华,糜若然,张双革;子宫内膜间质细胞雌二醇的分泌及其调节[J];现代妇产科进展;2002年03期

9 张[?,石红;人子宫内膜细胞共培养体系对早期鼠胚体外发育的影响[J];生殖与避孕;2003年06期

10 黄冬梅,黄光英,陆付耳;胚泡围着床期子宫内膜细胞的增殖、分化与凋亡[J];生殖医学杂志;2004年05期

相关会议论文 前2条

1 李志刚;郎景和;冷金花;刘东远;刘珠凤;孙大为;朱兰;;环氧合酶——2选择性抑制剂与前列腺素E2对子宫内膜异位症子宫内膜细胞COX-2mRNA表达与凋亡的影响[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年

2 郭一帆;李卓伦;李启辉;杨树标;何柏松;姚元庆;;重组人类白细胞抗原-G5对子宫内膜细胞容受性的影响[A];中华医学会第十次全国妇产科学术会议产科会场（产科学组、妊高症学组）论文汇编[C];2012年

相关博士学位论文 前2条

1 王永刚;大鼠骨髓间充质干细胞向子宫内膜细胞分化的体外实验[D];中南大学;2012年

2 姚佳;孕酮与干扰素-τ对体外培养的牛子宫内膜细胞基因组表达谱的影响[D];四川农业大学;2011年

相关硕士学位论文 前10条

1 陈秀荔;孕早期家兔子宫内膜细胞分离与培养方法的建立[D];西北农林科技大学;2004年

2 何亚琼;以羊膜为载体培养子宫内膜细胞的实验研究[D];中南大学;2010年

3 方庆仙;二VA英调节人离体子宫内膜细胞表达IL-6和TNF-α的研究[D];浙江大学;2005年

4 王红燕;胰岛素、睾酮、AngⅡ、Ang-（1-7）对体外培养子宫内膜细胞的血管紧张素受体及细胞发育的影响[D];河北医科大学;2013年

5 刘帅;反义脱氧寡核苷酸对子宫内膜细胞FUT7/sLe～x表达及胚胎着床的影响[D];大连医科大学;2006年

6 丁竹筠;钙离子激活的钾离子通道在人子宫内膜蛋白水平的表达及其功能研究[D];浙江大学;2007年

7 陈怀敏;三七有效成分对人子宫内膜细胞炎症反应的作用[D];湖南中医药大学;2006年

8 马丽娟;二氧化碳气体对离体子宫内膜细胞增殖的影响[D];浙江大学;2007年

9 李广新;EGF对子宫内膜细胞FUT1/FUT4和LeY表达及胚胎着床的影响[D];大连医科大学;2007年

10 王艳玲;人分泌早期子宫内膜细胞共培养体系对早期鼠胚体外发育的影响[D];安徽医科大学;2004年

本文编号：2376763