GRIM-19差异性表达与稽留流产的相关性研究

发布时间：2018-12-14 19:55

【摘要】：目的通过检测GRIM-19在稽留流产与正常早孕患者绒毛组织中的表达情况,探讨GRIM-19表达差异与稽留流产发生的相关性。探究稽留流产患者绒毛组织中细胞凋亡情况与微血管密度变化,进而通过体内体外实验研究GRIM-19表达变化对线粒体膜电位和细胞凋亡以及血管生成的影响,进一步研究GRIM-19的差异性表达引起稽留流产的机制。方法体内实验：选择胚胎停育患者50例为实验组,正常早孕患者50例为对照组。用免疫组化法对绒毛组织中GRIM-19进行定位检测；采用Western blot和Real-time PCR检测绒毛组织中GRIM-19蛋白和mRNA水平。采用原位末端标记技术(TUNEL)评估两组绒毛组织中的细胞凋亡情况,通过比较CD34在两组绒毛组织中的表达差异分析微血管密度(MVD)变化。同时检测P53、STAT3、HIF-1α和VEGF在绒毛组织中的表达及定位,并用spearman相关性分析方法分析了稽留流产的绒毛组织中GRIM-19mRNA与它们的mRNA表达的相关性。体外实验：采用GRIM-19-siRNA转染技术使HTR-8/SVneo细胞GRIM-19低表达,应用荧光探针JC-1测定转染后细胞线粒体跨膜电位,AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡率,并用ELSA的方法测定转染后HTR-8/SVneo细胞培养液中VEGF的表达变化。结果 1. GRIM-19主要表达于绒毛细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞和绒毛外细胞滋养细胞柱的细胞质中。且与对照组相比稽留流产组绒毛中GRIM-19蛋白和mRNA的表达量降低(P0.01)。 2.原位末端标记技术(TUNEL)方法显示胚胎停育组绒毛组织中细胞凋亡数量显著高于对照组。 3.P53主要表达于两组绒毛细胞的细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞和绒毛外细胞滋养细胞柱的细胞核中,但稽留流产组的合体滋养层细胞和绒毛外细胞滋养细胞柱的细胞的阳性表达率显著高于对照组(P0.01),而细胞滋养层中无统计学差异(p=0.458)。稽留流产组P53蛋白和mRNA的表达量较对照组显著升高(P0.01)。稽留流产组绒毛组织中GRIM-19和P53的mRNA的表达量呈显著负相关(r=-0.37,p=0.028) 4. GRIM-19-siRNA转染后HTR-8/SVneo细胞线粒体膜电位显著下降,细胞凋亡率显著增加。且两者呈显著的负相关性(r=-0.754,P0.01)。 5.稽留流产组微血管密度(MVD)显著低于对照组(P0.01)。 6. STAT3、HIF-1α和VEGF均主要表达于绒毛细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞和绒毛外细胞滋养细胞柱的细胞质中；对照组中VEGF在细胞滋养层呈强表达,而在稽留流产组的细胞滋养层细胞中的表达显著降低。STAT3与HIF-1α的蛋白和mRNA的表达量稽留流产组较对照组显著升高(P0.01,P0.05),而VEGF稽留流产组较对照组显著降低(P0.05)。稽留流产组GRIM-19和STAT3的mRNA的表达量呈显著负相关(r=-0.21,P=0.009),和HIF-1α也显著负相关(r=-0.49,P=0.003),而与VEGF呈显著正相关(r=0.56,P=0.01)。 7. GRIM-19转染HTR-8/SVneo细胞后48小时的细胞培养液中VEGF的分泌量减少(P0.05),转染后72小时显著减少(P0.01)。结论 GRIM-19在早期妊娠中起重要作用,而GRIM-19的低表达可能通过线粒体介导的细胞凋亡和减少新生血管生成导致的稽留流产的发生。
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【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R714.21

【参考文献】