内质网应激介导的凋亡耐受在甲氨蝶呤耐药绒癌发生机制中的作用

发布时间：2018-12-23 07:59

【摘要】：目的:初步探讨内质网应激介导的凋亡耐受在甲氨蝶呤耐药绒癌发生机制中的作用。方法:以人绒毛膜上皮癌JEG-3细胞及本课题组前期构建的甲氨蝶呤耐药绒癌细胞(JEG-3/MTXR)为研究对象。采用WST法评估甲氨蝶呤处理后JEG-3/MTXR和JEG-3亲本细胞的细胞活力,Western blot法测定两种细胞中caspase-9激活、GRP78和GADD153蛋白的表达。RNA干扰法沉默JEG/MTXR细胞中GADD153基因,Western blot法测定caspase-9蛋白激活的情况。结果:不同浓度梯度的甲氨蝶呤诱导后,JEG-3亲本细胞系的细胞生存率显著降低。相同浓度甲氨蝶呤作用后,JEG-3/MTXR细胞内切割caspase-9无增加,JEG-3亲本细胞内caspase-9激活并切割。JEG-3/MTXR和JEG-3细胞中GRP78表达水平呈时间依赖性上调;JEG-3/MTXR细胞中GADD153蛋白水平无显著上调,而JEG-3亲本细胞内出现显著上调。沉默GADD153基因可抑制MTX引起的切割caspase-9蛋白水平上调。结论:内质网应激介导的凋亡耐受可能参与甲氨蝶呤耐药绒癌发生机制。
[Abstract]:Aim: to investigate the role of endoplasmic reticulum stress-mediated apoptosis tolerance in methotrexate resistant choriocarcinoma. Methods: human choriocarcinoma JEG-3 cells and methotrexate resistant choriocarcinoma cells (JEG-3/MTXR) were studied. The cell viability of JEG-3/MTXR and JEG-3 parental cells after methotrexate treatment was evaluated by WST method. The activation of caspase-9 and the expression of GRP78 and GADD153 protein were measured by, Western blot method. GADD153 gene was silenced by RNA interference method in JEG/MTXR cells. The activation of caspase-9 protein was measured by Western blot method. Results: the cell survival rate of JEG-3 parental cell line decreased significantly after different concentration gradient methotrexate induction. After the same concentration of methotrexate, caspase-9 cleavage in JEG-3/MTXR cells was not increased, but caspase-9 was activated and dissected in JEG-3 parent cells. GRP78 expression in JEG-3/MTXR and JEG-3 cells was up-regulated in a time-dependent manner. The level of GADD153 protein in JEG-3/MTXR cells was not significantly up-regulated, but that in JEG-3 parent cells was significantly up-regulated. Silencing GADD153 gene can inhibit the up-regulation of caspase-9 cleavage protein level induced by MTX. Conclusion: endoplasmic reticulum stress-mediated apoptosis tolerance may be involved in the pathogenesis of methotrexate resistant choriocarcinoma.
【作者单位】： 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院妇产科;国家人口计生委科学技术研究所生殖健康与计划生育服务中心;
【基金】：国家自然科学基金资助(No:81272890)
【分类号】：R737.33

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本文编号：2389657