Maspin调控脐静脉内皮细胞损伤参与子痫前期发生的分子机制研究

发布时间：2019-01-04 14:05

【摘要】：第一部分Maspin基因在脐静脉内皮细胞中表达的研究目的研究正常及缺氧环境下maspin基因在脐静脉内皮细胞株中的表达情况。方法利用化学物质二氯化钴(Cobalt(Ⅱ) chloride, CoCl2)构建细胞缺氧环境,依次采用实时荧光定量PCR (RT-PCR)和巢式PCR (Nest-PCR)的方法检测脐静脉内皮细胞株中maspin的mRNA表达情况,并采用蛋白印迹法(Western Blotting)检测正常及缺氧环境下maspin的蛋白表达情况。结果1.RT-PCR的结果显示,正常及缺氧条件下,maspin mRNA有微量表达。2.巢式PCR及琼脂糖凝胶电泳的结果显示,在196bp处见到明显的条带,提示正常及缺氧条件下,脐静脉内皮细胞中有微量mRNA的表达。3. Western blotting结果显示,正常及缺氧环境下,脐静脉内皮细胞株中均未见到明显的maspin蛋白条带。结论无论在正常或缺氧条件下,我们只能发现maspin在脐静脉内皮细胞株微量的mRNA表达,但无法检测到maspin蛋白的表达。我们认为脐静脉内皮细胞株中几乎没有maspin基因的表达。第二部分外源性重组人maspin蛋白对脐静脉内皮细胞功能的影响目的研究正常及缺氧环境下外源性重组人maspin蛋白对脐静脉内皮细胞功能的影响。方法分别在正常及缺氧环境下,使用3种不同浓度的重组人maspin蛋白(r-maspin)处理脐静脉内皮细胞。分别使用CCK8试剂盒、Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒、划痕实验、小管形成实验及一氧化氮(NO)试剂盒检测脐静脉内皮细胞的增殖、凋亡、迁移、管形成及一氧化氮的合成。结果1.正常氧环境下,脐静脉内皮细胞保持72小时持续增殖的趋势。然而,缺氧环境下,脐静脉内皮细胞的增殖受到显著抑制。正常氧环境下,r-maspin明显促进脐静脉内皮细胞的增殖,在处理的48小时后,促增殖的趋势达到高峰；低氧环境下,仅高浓度r-maspin可明显促进脐静脉内皮细胞的增殖。2.与正常氧环境相比,缺氧环境下脐静脉内皮细胞的凋亡无明显变化。正常氧环境及缺氧环境下,r-maspin对脐静脉内皮细胞均无明显的促凋亡作用。3.正常氧环境下,脐静脉内皮细胞间划痕的宽度随着时间的延长而逐渐变窄;而缺氧环境下,划痕的宽度随着时间的延长未发生明显变化,提示缺氧明显抑制脐静脉内皮细胞的迁移能力。正常及缺氧环境下,r-maspin处理脐静脉内皮细胞后,随着时间的延长,细胞间划痕的宽度均未发生明显改变,提示脐静脉内皮细胞没有发生明显的迁移。4.管形成实验的结果显示：与正常对照组相比,缺氧环境下,脐静脉内皮细胞明显聚集成团,形成的管腔直径较小,但管腔数量几乎是正常对照组的3倍。正常环境下,不同浓度r-maspin处理后,HUVECs形成的管腔直径较对照组缩窄了50%,管腔数量增加2倍。缺氧环境下,r-masp in也能够明显抑制HUVECs的管形成。高浓度r-maspin处理后,脐静脉内皮细胞几乎不能形成完整的管腔,仅能形成不完整的管腔分支。5.与正常对照组相比,缺氧环境下脐静脉内皮细胞内合成的一氧化氮减少了50%(84.84±12.32 vs.171.3±6.332,P0.01)。正常环境下,r-maspin处理后,脐静脉内皮细胞内合成的一氧化氮显著的减少。缺氧环境下,r-maspin也可使一氧化氮的合成明显的减少,但是,差异没有显著的统计学意义。结论R-maspin蛋白明显促进HUVECs的增殖,同时抑制H UVECs的一氧化氮的合成和管形成能力,导致增多的狭窄管腔的形成,但是对HUVEC s的凋亡和迁移能力无明显影响。这些结果证明外源性重组人maspin蛋白调控脐静脉内皮细胞的生物学功能。第三部分Maspin调控脐静脉内皮细胞功能的分子机制研究目的探讨maspin调控脐静脉内皮细胞功能的分子机制。方法分别在正常及缺氧环境下,使用3种不同浓度的重组人maspin蛋白(r-maspin)处理脐静脉内皮细胞。分别采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)及蛋白质印迹法(Western Blotting)检测脐静脉内皮细胞内MMP2的mRNA及蛋白表达情况,采用明胶酶谱法检测脐静脉内皮细胞内MMP2的活性。结果1.与正常对照组相比,缺氧环境下MMP2的mRNA表达水平无明显改变；正常氧环境下,MMP2的蛋白表达水平随着r-maspin浓度的升高而升高,高浓度r-maspin显著促进MMP2的蛋白表达；与之相反,缺氧环境下,MMP2的蛋白表达水平随着r-maspin浓度的升高而降低,高浓度r-maspin显著抑制MMP2的蛋白表达。2.明胶酶谱的结果显示：正常氧环境下,活性的MMP2 (63-KD)和MMP2的前体形式(72-KD)均有表达;而缺氧环境下,只能检测到MMP2的前体形式(72-KD)。正常氧环境下,高浓度r-maspin存在时只有72-KD形式的MMP2存在。结论无论正常氧环境或缺氧环境下,r-maspin均不影响MMP2的mRNA表达。高浓度r-maspin在正常氧环境下明显促进MMP2的蛋白表达,而在缺氧环境下明显抑制MMP2的蛋白表达。正常氧环境下,r-maspin抑制MMP2的活性,缺氧可直接抑制MMP2的活性。这些结果说明maspin可通过改变MMP2的表达和活性而影响脐静脉内皮细胞的功能。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R714.244

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 方玉强;黄岚;赵晓辉;尹阳光;康华丽;邓梦杨;;脐静脉内皮细胞高表达内皮脂肪酶后其生物学特性的变化及意义[J];心血管康复医学杂志;2007年06期

2 李力,陈竹钦,陈伟,许岚,唐淑英,冯素珍;妊娠高血压综合征时脐静脉内皮细胞损伤的研究[J];解放军医学杂志;1998年01期

3 刘金波;邓华聪;葛倩;于冬青;;脂联素对脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1的影响[J];中华糖尿病杂志;2005年06期

4 丛祥凤，张春玲，刘俊明，张英珊;人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养人的脐静脉内皮细胞生长的影响[J];生物化学杂志;1996年05期

5 董红梅,喻伦银,贾宗智,邓末宏;TNFα对培养的脐静脉内皮细胞的损伤作用[J];临床与实验病理学杂志;2002年04期

6 张晓启,刘旭盛;HOXB2反义寡核苷酸对原代脐静脉内皮细胞生物学特性的影响[J];中华医学杂志;2002年13期

7 张继红;马存根;吕秀梅;李占海;;高糖对脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子mRNA表达的影响[J];临床和实验医学杂志;2007年10期

8 陈丽华,李林,张新海,刘雪松,金伯泉;CD226分子参与脐静脉内皮细胞的功能[J];第四军医大学学报;2003年21期

9 王振焕;陈雄英;胡清华;钟华;邓峰美;何芳;;小凹蛋白-1和钙受体在人的脐静脉内皮细胞的表达[J];石河子大学学报(自然科学版);2010年02期

10 陈丽华,刘雪松,金伯泉;肿瘤坏死因子α作用后脐静脉内皮细胞质内钙离子的变化[J];医学研究生学报;2003年01期

相关会议论文 前8条

1 朱颖;罗心平;朱军;梁旺;马端;;氧化低密度脂蛋白对脐静脉内皮细胞组织因子途径抑制物2表达的影响[A];第一届全国中西医结合心血管病中青年医师论坛论文汇编[C];2008年

2 刘元林;江小霞;要晖宇;朱恒;张毅;毛宁;;脐静脉内皮细胞的分离、培养和鉴定[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年

3 李力;朱锡光;俞丽丽;;妊高征血清对脐静脉内皮细胞影响的研究[A];中华医学会第二次全国产科热点问题研讨会及第一届全国产科主任论坛学术会议论文汇编[C];2004年

4 方玉强;黄岚;赵晓辉;尹阳光;康华丽;邓梦杨;;超表达内皮脂肪酶对脐静脉内皮细胞部分生物学特性的影响及意义[A];中华医学会心血管病学分会第十次全国心血管病学术会议汇编[C];2008年

5 朱玉萍;沈涛;王抒;黎健;国汉邦;黄秀清;;肿瘤坏死因子α引起脐静脉内皮细胞粘附功能损伤的作用机制的研究[A];第11届全国脂质与脂蛋白学术会议论文汇编[C];2012年

6 陈凤容;胡亚莉;阎岩;朱莉萍;胡清华;;钙贮池排空后STIM1分布的变化及其在核钙信号中的作用[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年

7 李怡然;陈晓红;;复方丹参和盐酸川芎嗪促进辐射后脐静脉内皮细胞的增殖与迁移作用机制的研究[A];全国第十二届生化与分子药理学学术会议论文集[C];2011年

8 刘松君;黄引平;李咏生;周晓燕;蔡蕾;叶笃筠;;脂氧素对缺氧损伤脐静脉内皮细胞的保护及其机制研究[A];2008年浙江省妇产科学学术年会暨浙江省医师协会妇产科医师分会成立大会论文汇编[C];2008年

相关博士学位论文 前4条

1 张莹;Maspin调控脐静脉内皮细胞损伤参与子痫前期发生的分子机制研究[D];华中科技大学;2016年

2 鞠镐;大蒜素对动脉粥样硬化班块稳定的机制研究[D];北京中医药大学;2005年

3 潘宏伟;护骨素对人类脐静脉内皮细胞粘附功能的影响及其机制探讨[D];中南大学;2008年

4 万静;过氧化物酶体增殖物激活受体γ在动脉粥样硬化中的分子作用机制[D];华中科技大学;2006年

相关硕士学位论文 前10条

1 冯慧;脐静脉内皮细胞图像分割算法研究及系统实现[D];南昌大学;2016年

2 李静;芪丹通脉片联合骨髓间充质干细胞修复同型半胱氨酸诱导脐静脉内皮细胞损伤的实验研究[D];第四军医大学;2007年

3 熊莺;柚皮苷对高糖诱导的脐静脉内皮细胞与单核细胞粘附的抑制作用及其机制研究[D];南方医科大学;2010年

4 方春梅;高表达整合素连接激酶对脐静脉内皮细胞的影响[D];南京医科大学;2012年

5 吕自明;重组人肿瘤坏死因子α影响人脐静脉内皮细胞活性及PD-L1蛋白表达的研究[D];南方医科大学;2013年

6 王玲香;重组质粒pEGFP-sPLA_2-ⅡA的构建及在脐静脉内皮细胞中的表达[D];福建医科大学;2010年

7 龙日;JNK通路介导LPS诱导脐静脉内皮细胞PD-L1表达的实验研究[D];南方医科大学;2013年

8 李圆圆;尼可地尔通过调节硫氧还蛋白的表减轻脐静脉内皮细胞的氧化应激[D];华中科技大学;2013年

9 梁斌;血管紧张素-（1-7）对血管紧张素Ⅱ诱导的脐静脉内皮细胞ICAM-1和VCAM-1的影响[D];山西医科大学;2007年

10 李睿;银杏内酯B抑制ox-LDL诱导脐静脉内皮细胞炎症损伤的分子机制研究[D];北京中医药大学;2007年

，

本文编号：2400387