雌性大鼠高龄生育对子代发育和学习记忆能力的影响

发布时间：2019-01-16 12:06

【摘要】：随着社会发展,社会与经济压力的增加,人们婚育观念逐渐发生改变,使高龄生育呈逐年增加的趋势。尤其是2016年我国二胎政策的全面实施,可以预见在未来的几年内我国将会呈现高龄生育的高峰。目前,高龄生育对子代的生长和发育的影响尚无定论。一些流行病学证据表明高龄生育对子代有负面影响,子代患唐氏综合征、精神障碍等疾病的风险更高。也有流行病学研究则提出了不同的看法,认为高龄生育和子女的神经发育和智力之间相关。为了探讨高龄生育对子代生长发育和学习记忆能力的影响,我们记录了高龄雌鼠与青年雌鼠生育的子代发育过程中发育相关指标,采用Morris水迷宫检测高龄雌鼠与青年雌鼠生育的子代的空间学习和记忆能力,采用HE染色和尼氏染色观察海马形态学的变化。目的研究高龄雌鼠与青年雌鼠生育的子代出生后发育过程中发育相关指标的差异,检测高龄雌鼠与青年雌鼠子代2月龄学习记忆能力的差异及海马形态学的差异。材料与方法1.实验动物和分组:清洁级SD大鼠购自郑州大学实验动物中心。将6只3月龄和7只12月龄的雌性大鼠与随机选择的3月龄雄鼠单独合笼,雌鼠怀孕后将雄鼠拿出,待雌鼠自然分娩。记录每窝从雌雄合笼至仔鼠出生的天数。在分娩后24 h内记录每窝产仔数和雌雄性别比例。根据12月龄雌鼠的产仔数和雌雄比例,随机选择3月龄雌鼠所生仔鼠,将多余的仔鼠处死。将12月龄雌鼠所生仔鼠分为高龄生育组,3月龄雌鼠所生仔鼠分为青年生育组。2.生育能力检测:记录合笼-分娩天数、每窝产仔数量、雌雄比例。3.仔鼠发育过程中发育相关指标检测:详细记录仔鼠出生后的第1、3、7、14、21、28天的体重,并记录耳廓分离时间、切齿萌出时间和睁眼时间等。4.Morris水迷宫检测:将两组仔鼠饲养至2月龄,采用Morris水迷宫连续7天对动物进行定位航行实验和空间搜索实验。5.海马组织形态学检测:在青年生育组与高龄生育组Morris水迷宫结束后处死大鼠并取脑组织,放入4%多聚甲醛固定并做石蜡包埋,石蜡连续冠状切片进行HE染色和尼氏染色,镜下观察海马组织的形态学特征。6.统计学分析:采用SPSS17.0统计学软件进行数据分析。对于青年生育组和高龄生育组仔鼠出生后的体重变化、Morris水迷宫定位航行实验逃避潜伏期和游泳距离采用重复测量设计资料的单因素方差分析。对于两组生育能力、发育指标、空间探索实验平台穿越次数和目标象限滞留时间百分比的比较,采用两独立样本的t检验。检验水准取α=0.05。结果1.生育能力的比较:3月龄雌鼠合笼-分娩天数为23.17±0.82 d,12月龄雌鼠合笼-分娩天数为30.93±2.41 d,12月龄雌鼠合笼-分娩天数显著长于3月龄雌鼠(P0.01)。3月龄雌鼠每窝产仔数为13.00±2.61只,12月龄雌鼠每窝产仔数为4.86±1.35只,12月龄雌鼠每窝产仔数显著少于3月龄雌鼠(P0.01)。3月龄雌鼠所生仔鼠雄性所占百分比为47.83±6.27%,12月龄雌鼠所生仔鼠雄性所占百分比为44.59±14.30%,12月龄雌鼠与3月龄雌鼠所生仔鼠雄性所占百分比无显著差异(P0.05)。2.仔鼠发育过程中发育相关指标:在两组仔鼠出生后的第1、3、7、14、21、28天记录两组仔鼠的体重。各组每一时间点的体重均比前一时间点增加(P0.01)。时间因素即体重增重天数的作用不随分组的不同而有不同(P0.05)。青年生育组和高龄生育组两组随时间变化的趋势大致相同,青年生育组和高龄生育组之间不同时间点体重的差异无统计学意义(P0.05)。青年生育组仔鼠耳廓分离时间为3.57±0.31 d,高龄生育组仔鼠耳廓分离时间为3.66±0.29 d,两组间无显著差异(P0.05)。青年生育组切齿萌出时间为8.22±0.57 d,高龄生育组为8.43±0.59 d,两组间无显著差异(P0.05)。青年生育组睁眼时间为15.90±0.97d,高龄生育组为16.18±0.55 d,两组间无显著差异(P0.05)。3.Morris水迷宫结果:水迷宫测试开始前一天测量两组动物体重,高龄生育组与青年生育组大鼠体重并无显著差异(P0.05)。定位航行实验:经过连续6天的训练,两组的逃避潜伏期均显著缩短(P0.01),但高龄生育组潜伏期较青年生育组下降缓慢,且每日所测潜伏期均显著长于青年生育组(P0.01)。定位航行实验的第1、2、3d高龄生育组寻找隐藏平台游泳总距离显著长于青年生育组(P0.05)。在第4、5、6d高龄生育组和青年生育组大鼠在寻找隐藏平台时游泳距离的差异没有统计学意义(P0.05)。空间搜索实验:青年生育组在目标象限游泳时间占总时间百分比为38.95±1.68%,高龄生育组为28.54±2.41%,高龄生育组在目标象限游泳时间显著少于青年生育组(P0.05)。青年生育组穿越原平台位置为3.57±0.32次,高龄生育组为1.74±0.27次,高龄生育组穿越原平台位置次数显著少于青年生育组(P0.05)。4.海马组织形态学结果:HE染色结果显示,高龄生育组和青年生育组大鼠海马组织结构层次清晰完整,颗粒细胞、锥体细胞等结构完整,轮廓清晰可见,排列密集而且整齐,层次紧密,胞核大而圆,细胞膜完整,胞核居中清楚,细胞数量多而清晰,细胞周围间隙紧密无水肿;青年生育组和高龄生育组组间无明显差异。尼氏染色显示,高龄生育组和青年生育组海马CA1、CA3区锥体细胞层细胞排列整齐紧密,呈锥体状、圆球状,胞质呈深蓝色,细胞数量多而密集;细胞核大而圆,位于中央,胞质内可见深蓝色颗粒状或斑块状尼氏体;高龄生育组和青年生育组组间无明显差异。结论1.高龄生育对雌鼠生育能力有显著的负面影响,但不影响子代的出生性别比例。2.雌鼠高龄生育对子代体重、耳廓分离时间、切齿萌出时间、睁眼时间和海马结构无显著影响。3.雌鼠高龄生育导致子代大鼠成年期空间学习记忆能力减弱,其机制有待进一步探索。
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【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R714

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