辐射及氯化两面针碱对宫颈癌中IER5基因表达影响的研究

发布时间：2019-01-28 09:27

【摘要】：目的：本实验旨在研究人宫颈癌组织中IER5基因的表达与辐射剂量的效应关系，以及氯化两面针碱对人宫颈癌Hela细胞中IER5基因表达的影响，初步探讨氯化两面针碱的辐射增敏作用。材料与方法：本实验收集整理44例宫颈癌组织，均取自2011年11月至2012年12月期间在辽宁省肿瘤医院的宫颈癌患者的组织标本。其中包括治疗前组、10Gy辐射组、20Gy辐射组、30Gy辐射组、40Gy辐射组、50Gy辐射组和放疗量"g50Gy辐射组。采用werstern blot检测IER5蛋白表达量情况。同时体外培养人宫颈癌Hela细胞为研究对象，用不同浓度的氯化两面针碱处理Hela细胞24小时和48小时，，及氯化两面针碱联合辐射处理Hela细胞，用MTT法检测Hela细胞生长抑制情况；用流式细胞仪检测Hela细胞凋亡情况，用werstern blot检测Hela细胞IER5蛋白表达量情况。结果： 1辐射对宫颈癌组织IER5表达：治疗前组灰度值为0.87±0.15，10Gy辐射组灰度值为0.81±0.13，20Gy辐射组灰度值为1.37±0.19，30Gy辐射组灰度值为1.53±0.47，40Gy辐射组灰度值为1.12±0.24，50Gy辐射组组灰度值为0.95±0.83，50Gy辐射组灰度值为1.05±0.26。10Gy辐射组与治疗前组相比P=0.6360.05,差异不具有统计学意义；20Gy辐射组、30Gy辐射组及40Gy辐射组分别与治疗前组相比P0.05，其差异具有统计学意义；50Gy辐射组及50Gy辐射组分别与治疗前组相比P0.05，其差异不具有统计学意义。30Gy辐射组与其他组相比P0.05，其差异具有统计学意义。 2氯化两面针碱对Hela细胞的影响 2.1.MTT法检测细胞增殖活性结果显示：氯化两面针碱能够抑制Hela细胞生长,并呈一定的“时间-剂量”依赖性（P0.05），氯化两面针碱联合辐射后其“时间-剂量”依赖性依然存在（P0.05）具有统计学意义。氯化两面针碱联合辐射组与单纯用药组相比，对肿瘤细胞的生长抑制率前者高于后者，差异（P0.05）具有统计学意义。氯化两面针碱在4μg/ml组在48小时后抑制率达47.7%接近半数抑制率，使用ORIGIN50软件分析MTT数据及分析画图测出48小时氯化两面针碱IC50为3.97418μg/ml。 2.2流式细胞术检测细胞凋亡结果：氯化两面针碱能够使Hela细胞凋亡,并呈一定的“时间-剂量”依赖性（P0.05），联合辐射后其“时间-剂量”依赖性依然存在（P0.05），差异具有统计学意义。氯化两面针碱联合辐射组与单纯用药组相比，在同一时间、同一浓度相比细胞凋亡率前者高于后者（P0.05），差异具有统计学意义。 2.3. Western blot印迹杂交检测蛋白IER5的表达变化结果：4Gy辐射剂量下辐射组与对照组，辐射组IER5表达量是对照组的1.29倍，这表明辐射能够诱导Hela细胞IER5表达量上调。药物组与对照组相比，IER5表达量是对照组的1.47倍，这表明氯化两面针碱可能诱导IER5表达上调。辐射联合药物组与辐射组相比，IER5表达量是辐射组的1.21倍，IER5表达量是对照组的1.47倍。结论： 1宫颈癌组织中IER5基因在辐射剂量20～40Gy之间时，IER5蛋白表达上调，在一定的辐射剂量下，IER5基因随着辐射剂量增加表达量大致呈先升高在下降的趋势，并且30Gy辐射组IER5基因上调最明显。 2氯化两面针碱能够抑制宫颈癌Hela细胞生长，促进肿瘤细胞凋亡，并呈一定的“时间-剂量”依赖性（P0.05）；氯化两面针碱联合辐射后能够抑制宫颈癌Hela细胞生长，促进肿瘤细胞凋亡，呈一定的“时间-剂量”依赖性（P0.05）。其机制可能与上调辐射敏感基因IER5有关。
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【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.33

【参考文献】