叶酸受体α对宫颈癌细胞ERK信号通路的调节作用

发布时间：2019-01-30 20:34

【摘要】：目的 宫颈癌是严重危害全球女性健康的第二大妇科肿瘤，高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染是其主要的危险因素，但并非唯一因素。研究发现，叶酸受体（FR）在多种肿瘤中表达异常，并且与肿瘤的发生发展密切相关。已有研究表明，FR在宫颈癌细胞中高表达，但具体的作用机制还未见报道。本研究选择从Src到细胞内核转录因子ERK信号通路中的关键因子Src、ERK1/2、c-Fos和c-Jun为靶点，检测宫颈癌细胞中FR对其表达和功能变化的影响，探讨FR介导ERK信号通路对宫颈癌产生的作用及其机制。 方法 采用流式细胞术（FCM）筛选FR阳性细胞的基础上，以FR阳性率最高的Hela细胞和FR阳性率最低的C33A细胞为实验对象，并对FR阳性率最高的Hela细胞进行FR siRNA干扰。采用细胞计数检测各组宫颈癌细胞的生长情况，CCK-8法检测各组细胞的细胞活性，流式细胞仪分析各组细胞的增殖、凋亡情况及FR的表达水平，Real-time PCR检测各组细胞FR、Src、ERK1/2、c-Fos和c-Jun mRNA的表达水平，Western-blot法检测各组细胞Src、ERK1/2、c-Fos和c-Jun蛋白表达水平。采用SPSS17.0软件对数据进行录入和分析，服从正态分布且方差齐性资料采用ANOVA和Dunnett-t检验，方差不齐时采用Welch检验，组间两两比较使用LSD-t检验，两种细胞间分析比较采用两独立样本t检验。 结果 1.不同宫颈癌细胞一般生物学性状比较：（1）Hela和C33A细胞计数在24h时差异无统计学意义（P0.05），在48h、72h、96h和120h各个时间点Hela细胞数均多于C33A细胞数，差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）Hela细胞增殖指数（PI）和处于S期、G2/M期细胞比例均高于C33A细胞，细胞凋亡率和处于G0/G1期细胞比例均低于C33A细胞，差异均有统计学意义（P＜0.05）。 2.不同宫颈癌细胞ERK信号通路各相关因子表达的比较：（1）Hela细胞Src、ERK1和c-Jun mRNA相对表达量均明显低于C33A细胞，差异均有统计学意义（P＜0.05）；而Hela和C33A细胞的ERK2和c-Fos mRNA相对表达量差异则均无统计学意义（P0.05）。（2）C33A细胞p-Src、非磷酸化ERK1/2、p-c-Fos、非磷酸化c-Jun和p-c-Jun蛋白表达水平均低于Hela细胞，差异均有统计学意义（P＜0.05）；而Hela和C33A细胞非磷酸化Src、p-ERK1/2和非磷酸化c-Fos蛋白表达水平差异则均无统计学意义（P0.05）。 3.FR对宫颈癌细胞一般生物学性状的影响：（1）随着转染时间的延长，FR干扰组细胞活性明显降低（P＜0.05），而对照组和阴性片段转染组随着时间延长，细胞活性逐渐增加。（2）FR干扰组细胞增殖指数（PI）降低，处于G0/G1期细胞比例增加，S期与G2/M期细胞比例下降，凋亡率升高。 4. FR对宫颈癌细胞ERK信号通路各相关因子表达的影响：（1）FR干扰后，Src、ERK1、ERK2和c-Jun mRNA相对表达量均增加，而c-Fos mRNA表达水平差异无明显变化（P0.05）。（2）FR干扰后，p-Src蛋白表达水平升高，p-ERK1/2和p-c-Fos蛋白表达水平均降低，差异均有统计学意义（P＜0.05），而非磷酸化Src、非磷酸化ERK1/2、非磷酸化c-Fos、非磷酸化c-Jun和p-c-Jun蛋白表达水平差异均无统计学意义（P0.05）。 结论 1.下调FR后，宫颈癌Hela细胞的活性下降，细胞凋亡率升高，处于G0/G1期细胞比例增多，Src、ERK1/2和c-Jun因子的mRNA表达水平以及p-Src蛋白表达水平均上调，而p-ERK1/2、c-Fos和p-c-Fos蛋白表达水平均下调，提示，FR可上调ERK信号通路中的关键因子ERK1/2、c-Fos和c-Jun的蛋白表达，促进其磷酸化。mRNA表达水平升高提示FR下调作用的靶点可能在蛋白翻译和修饰水平，导致蛋白表达水平下调，而同时可能存在负反馈作用，导致相应指标mRNA水平升高。 2. FR可下调宫颈癌Hela细胞ERK上游因子Src mRNA和蛋白的表达，提示FR在对ERK信号通路的激活中可能存在其他的中间因子，而转染后Src的上调，，可能与ERK信号通路中被激活因子的负反馈调节有关，具体机制还需进一步研究。 3. FR可通过调节ERK信号通路中关键因子Src、ERK1/2、c-Jun和c-Fos的蛋白表达，可促进宫颈癌Hela细胞的增殖、抑制细胞凋亡和调节细胞周期各时相比例。同时，本研究结果提示，FR可作为宫颈癌靶向治疗的潜在载体。 4. FR和HPV双阳性宫颈癌细胞较FR和HPV双阴性宫颈癌细胞细胞增殖快，细胞凋亡率低，处于G0/G1期细胞比例低，ERK信号通路各因子mRNA的表达水平低，蛋白表达水平高。提示FR与HPV感染对ERK信号通路中关键因子的表达均有调节作用，且在宫颈癌的发生与进展中可能存在协同作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.33

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本文编号：2418482