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卵巢功能减退的临床影响因素与实验研究

发布时间:2019-03-25 07:03
【摘要】:目的: 1、分析肾虚肝郁型DOR患者的生命质量现状及其影响因素,为肾虚肝郁DOR的预防保健提供科学依据,为肾虚肝郁DOR的治疗提供新的思路和方法。 2、确定CTX致大鼠卵巢功能损害模型建模成功。 3、观察加减归肾丸对环磷酰胺所致卵巢功能减退大鼠卵巢功能的影响。 方法: 1、选择2012年10月——2013年10月,于广州中医药大学第一附属医院妇科门诊、广东省第二中医院妇科门诊就诊,符合纳入标准者50例作为观察组。选择同期来我院体检的月经正常的,年龄在18-40岁之间的健康妇女50例作为健康对照组。观察组及健康对照组均采用统一信息登记表,专人面对面详细询问病史,并填写《健康测量量表SF-36))。以分析肾虚肝郁型DOR患者的生命质量现状及其影响因素。 2、预试验 (1)参照刘惠芬等造模方法予CTX75mg/kg腹腔单次注射,确定照模成功。 (2)将48只SD雌性大鼠随机分为空白对照组、模型组、中药组,每组均于用药后1、2、3、4周每日观察大鼠动情周期,每周每组处死4只大鼠,称取卵巢重量、进行卵巢组织形态学观察及卵泡计数、测定血清E2、FSH,评估卵巢储备功能,观察大鼠卵巢功能恢复情况。 3、加减归肾丸对环磷酰胺所致卵巢功能减退大鼠卵巢功能的影响 (1)参照刘惠芬等造模方法予CTX75mg/kg腹腔单次注射造模。 (2)大鼠造模1周后眼眶静脉丛取血分离血清测定E2、FSH水平,取造模成功大鼠40只随机分为5组,分别为空白对照组、模型组、中药高、中、低剂量组、西药对照组,每组8只。中药各剂量组及西药对照组大鼠按剂量灌胃给药,l0ml/kg,每天1次,连续4周,空白对照组、模型组大鼠给予等体积蒸馏水。 (3)各组大鼠均于用药4周内每日观察大鼠动情周期,给药4周结束后各组大鼠取血测定血清E2、FSH、LH、AMH、INHB,称取卵巢重量,进行卵巢组织形态学观察及卵泡计数,免疫组化测定VEGF、GDF-9表达,评估卵巢储备功能,观察大鼠卵巢功能恢复情况。 结果: 1、肾虚肝郁型DOR患者的生命质量及影响因素分析 (1)两组妇女身高、体重、BMI比较,差异无统计学意义(P0.05)。 (2)熬夜、吸烟、饮酒的人数在观察组中明显高于健康对照组,经常锻炼的人数在观察组中明显低于健康对照组,经统计学比较有显著性差异(P0.05);精神紧张、长期抑郁、遭受重大刺激、易生气的人数在观察组中明显高于健康对照组,经统计学比较有显著性差异(P0.05);感觉压力大、经常出差、大专以上的人数在观察组中明显高于健康对照组,与同事关系融洽的人数在观察组中明显低于健康对照组,经统计学比较有显著性差异(P0.05)。 (3)两组妇女生存质量状况比较:SF-36总体健康评分在观察组为711.41±18.91分,在健康对照组为1068.57±30.77分,经统计学比较有显著性差异(P0.05);生理健康评分、心理健康评分在观察组妇女明显低于健康对照组妇女,经统计学比较,有显著性差异(P0.05);PF、RP、BP、GH、VT、SF、RE、MH在观察组妇女明显低于健康对照组妇女,经统计学比较,有显著性差异(P0.05)。 2、预试验 (1)大鼠一般情况 空白对照组大鼠外观体征、行为活动、精神状态、摄食、饮水、被毛、呼吸、口、眼、鼻、耳、大小便形状颜色等均正常。模型组大鼠被毛疏松,活动减少,精神不振,四肢无力。中药组大鼠外观体征、行为活动、精神状态、摄食、饮水等于空白对照组大鼠无明显异常,被毛、呼吸、口、眼、鼻、耳、大小便形状颜色等均属正常。 (2)对动情周期的影响 空白对照组所有的大鼠阴道涂片均有规则的动情周期变化,周期为4-6d,中位数为5d。模型组大鼠在CTX注射后第1、2周阴道涂片显示动情周期发生改变,规则的动情周期变化消失,延长为8-17d,中位数为1ld。阴道涂片显示分泌物少,有较多散在的白细胞,少量上皮细胞,部分有少量的角化细胞和有核细胞,动情间期时间为5-7d。中药组大鼠在CTX注射后第1、2周阴道涂片显示动情周期也发生改变,规则的动情周期变化延长,为6-12d,中位数为9d。阴道涂片显示有少量散在白细胞,少量上皮细胞,少量的角化细胞和有核细胞,动情间期时间为2-4d。 (3)对卵巢功能减退大鼠血清中E2、FSH水平的影响 血清E2水平在模型组大鼠于2w、3w、4w时显著降低,与空白对照组比较有显著性差异(P0.05或P0.01)。在中药组大鼠于3w、4w时显著升高,与模型组比较有显著性差异(P0.05)。血清FSH水平在模型组大鼠于1w、2w、3w、4w时显著升高,与空白对照组比较有显著性差异(P0.05或P0.01)。在中药组大鼠于1w、2w、3w、4w时均显著降低,与模型组比较有显著性差异(P0.05)。 (4)对卵巢功能减退大鼠卵巢指数的影响 卵巢指数在模型组大鼠于2w、3w、4w时显著减小(P0.05或P0.01),与空白对照组比较有显著性差异。卵巢指数在中药组大鼠于1w、2w、3w、4w时均有一定程度升高,与模型组比较无显著性差异(P0.05)。 (5)对卵巢功能减退大鼠卵泡数目的影响 原始卵泡数在模型组大鼠于1w、2w、3w、4w时均显著减少,与空白对照组比较有显著性差异(P0.01);在中药组大鼠于1w、2w、3w、4w时均明显增多,与模型组比较有显著性差异(P0.01)。初级卵泡、次级卵泡、成熟卵泡、闭锁卵泡数在模型组大鼠于1w、2w、3w、4w时均显著增多,与空白对照组比较有显著性差异(P0.01);在中药组大鼠于1w、2w、3w时均明显减少,与模型组比较有显著性差异(P0.05)。 (6)对卵巢功能减退大鼠卵巢组织形态学的影响 空白对照组大鼠(n=4)卵巢镜下观察各受检卵巢(1w、2w、3w、4w)可清楚的分为皮质和髓质两部分,皮质部有较多大小不一、染色较深的原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡、成熟卵泡和闭锁卵泡、黄体及白体,间质腺少见,血管丰富,细胞与纤维组织构成皮质的基质,未发现间质出血、水肿、变性、坏死、纤维化等病变;髓质含丰富的神经、淋巴管和较多的血管,未见充血、变性坏死等异常改变。模型组大鼠(n=4)卵巢镜下观察各受检卵巢(1w、2w、3w、4w)髓质部分萎缩,皮质增生明显,有纤维化样变,闭锁卵泡显著加。中药组大鼠(n=4)卵巢镜下观察各受检卵巢(1w、2w、3w、4w)髓质基本正常,无明显萎缩,皮质增生较少,各级卵泡、黄体等基本同空白对照组,未见明显变性、纤维化等病变。 3、加减归肾丸对环磷酰胺所致卵巢功能减退大鼠卵巢功能的影响 (1)对卵巢功能减退大鼠体重的影响 大鼠腹腔注射CTX后1周,大鼠体重在模型组及各给药组与空白对照组比较显著下降(P0.05)。给药4周后,大鼠体重在模型组与空白对照组比较显著下降(P0.05);在中药各剂量组与西药对照组与模型组比较显著增加(P0.01),与空白对照组比较无显著性差异(P0.05)。 (2)大鼠动情周期的改变 通过阴道涂片观察所得,各组大鼠造模前动情周期变化规律,周期约4~5d。除空白对照组外,其余各组大鼠腹腔注射CTX后大鼠出现动情周期改变,停止于动情间期;空白对照组仍有规律的动情周期。模型组造模后4周内动情周期紊乱;中药高、中剂量组给药后14~15d出现完整的动情周期;中药低剂量组给药后19-20d左右开始出现动情前期,持续8~10d,至给药4周结束前出现动情期;西药对照组给药后15~17d出现动情周期,周期时间延长。 (3)对卵巢功能减退大鼠血清E2、FSH的影响 大鼠腹腔注射CTX后1周后,血清E2水平在模型组及各给药组大鼠与空白对照组比较显著下降(P0.01)。给药4周后,E2在中药各剂量组与西药对照组较给药前显著上升(P0.05),与模型组比较显著增加(P0.01);在模型组大鼠与空白对照组比较仍明显降低(P0.01)。 大鼠腹腔注射CTX后1周后,血清FSH水平在模型组及各给药组大鼠与空白对照组比较显著升高(P0.01)。给药4周后,FSH在中药各剂量组与西药对照组较给药前显著下降(P0.05),与模型组比较显著降低(P0.01),在模型组大鼠与空白对照组比较仍显著增高(P0.01)。 (4)对卵巢功能减退大鼠大鼠血清AMH、INHB的影响 大鼠腹腔注射CTX后1周后,AMH、INHB在模型组及各给药组大鼠与空白对照组比较显著下降(P0.05)。给药4周后,AMH、INHB在模型组大鼠与空白对照组比较显著下降(P0.01);在中药各剂量组及西药对照组与模型组比较显著增加(P0.01),与空白对照组比较无显著性差异(P0.05)。 (5)对卵巢功能减退大鼠大鼠卵巢指数的影响 大鼠给药4周后,卵巢指数在模型组大鼠与空白对照组比较明显下降(P0.01);在中药各剂量组与西药对照组与模型组比较显著增加(P0.01),与空白对照组比较无显著性差异(P0.05)。 (6)对卵巢功能减退大鼠卵泡数目的影响 给药4周后,原始卵泡计数在模型组大鼠与空白对照组比较明显减少(P0.01)。 原始卵泡计数在中药高、中剂量组与模型组比较显著增加(P0.01及P0.05);在中药高剂量组与空白对照组比较无统计学差异(PO.05)。 初级卵泡计数、生长卵泡计数、成熟卵泡计数在模型组与空白对照组比较有统计学差异(P0.05);在中药各剂量组与模型组比较显著减少(P0.05),与空白对照组比较无统计学差异(P0.05)。 (7)对大鼠卵巢结构形态学的影响 从卵巢组织病理切片镜下观察可知,空白对照组卵巢皮质结构正常,可见各级卵泡及黄体分布,形态正常,成熟卵泡体积较大,卵泡液较多。模型组卵巢有萎缩,生长卵泡减少,闭锁卵泡较多。中药高、中剂量组生长卵泡较模型组增多,出现较大直径的卵泡,闭锁卵泡减少。中药低剂量组生长卵泡仍较少,原始卵泡可见。西药对照组初级卵泡、生长卵泡增多,成熟卵泡可见。 (8)对大鼠卵巢组织VEGF、GDF-9表达的影响 应用免疫组化SP法对大鼠卵巢进行VEGF蛋白表达,以卵泡颗粒细胞棕黄色或褐色染色为阳性表达,并进行积分光密度测定。VEGF蛋白在模型组大鼠卵巢卵泡颗粒的表达与空白对照组比较显著减弱(P0.01),在中药各剂量组表达较模型组显著增强(P0.01),在中药高剂量组较空白对照组阳性表达增强(P0.01),在中药中剂量组与空白对照组比较无显著性差异(P0.05)。 应用免疫组化SP法对大鼠卵巢进行GDF-9蛋白表达,以初级及更大卵泡卵母细胞膜出现棕黄色或褐色染色为阳性表达,并进行积分光密度测定。GDF-9蛋白在模型组大鼠卵巢卵母细胞膜的表达减弱(P0.01),在中药各剂量组及西药对照组表达较模型组强(P0.01),在中药高、中剂量组与空白对照组比较无显著性差异(P0.05) 结论: 1、肾虚肝郁型DOR患者生命质量明显下降,具体表现在社会功能、精神健康及总体健康3个维度受到损害,DOR患者心理健康下降程度远大于躯体健康。其发病与社会、心理因素,生活习惯、文化程度等有关。 2、CTX单次腹腔注射可致SD大鼠卵泡发育障碍,性激素分泌紊乱,卵巢功能减退。给药后中药组FSH水平降低,E2水平升高,激素水平与空白对照组无显著性差异,说明加减归肾丸可恢复DOR大鼠动情周期,促进DOR大鼠卵泡的发育及排卵功能,改善DOR大鼠血清高促性腺激素低雌激素状态,从而恢复卵巢功能。 3、加减归肾丸可通过多种途径提高卵巢储备功能,具体表现在以下几方面:对下丘脑-垂体-卵巢轴的降调节,减少促性腺激素的分泌;提高DOR大鼠AMH水平;上调DOR大鼠颗粒细胞VEGF水平,通过旁分泌的形式刺激卵泡膜内皮细胞增生,促进卵巢血管生成;可上调DOR大鼠GDF-9蛋白的表达,以此促进始基卵泡募集,促进卵泡发育,抑制卵泡闭锁,以达到排卵的目的。
[Abstract]:......
【学位授予单位】:广州中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R711.75

【参考文献】

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本文编号:2446744

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