肿瘤相关巨噬细胞中EGFR活化对上皮性卵巢癌恶性行为的影响及机制研究

发布时间：2019-04-01 16:35

【摘要】：上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer, EOC)是妇科肿瘤中最常见的恶性肿瘤之一,卵巢癌细胞在腹腔内的广泛侵袭转移是导致患者预后差的重要原因。微环境中肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophages, TAMs)在卵巢癌侵袭转移中的作用越来越受到重视。巨噬细胞具有可塑性,不同的环境中,可以分化为不同的亚群(如M1、M2),不同亚群在分子表型及功能上存在显著差异。TAMs表现为M2型,具有促进肿瘤进展的作用。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)活化在肿瘤细胞侵袭转移中扮演重要角色。近来,巨噬细胞中EGF信号通路的作用也成为关注的热点。为探讨TAMs在上皮性卵巢癌进展中的作用和活化TAMs中EGF/EGFR信号通路对上皮性卵巢癌恶性行为的影响及分子机制,本课题研究分为以下三个部分：第一部分,分析TAMs的数量及比例与EOC患者临床病理特征及预后的关系。收集67例2007年1月至2008年12月期间在我院妇科肿瘤科诊断为EOC且腹水不少于200m1患者的临床病理资料,采用免疫组织化学及流式细胞术方法分析原发卵巢癌组织及腹水中CD163+TAMs的数量及比例,统计分析上述指标与患者临床病理特征及预后的关系。结果显示：癌组织中CD163+TAMs的数量与组织分化程度、FIGO (International Federation of Gynaecology and Obstetrics)分期及患者对铂类治疗的反应密切相关；腹水中,TAMs的比例与FIGO分期、淋巴结是否转移、腹水量、患者对化疗及铂类治疗的反应密切相关；并且癌组织中TAMs数量是患者无疾病进展生存期及总生存期的独立预后因素。第二部分,分析EGF在外周血单核细胞向TAMs分化中的作用。分离培养健康志愿者外周血单核细胞(Peripheral blood monocytes, MOs)及EOC患者腹水中TAMs,比较EGF处理后的MOs与TAMs分子表型和分泌细胞因子的差异,Transwell侵袭实验、MTT增殖实验及单层伤口愈合实验(Wound healing assay)检测不同处理后的条件培养基对卵巢癌细胞SKOV3侵袭、增殖及迁移能力的影响。结果表明：EGF在体外可诱导外周血来源单核细胞分化为M2型巨噬细胞样TAMs,其分子表型和分泌型表现为CD163highIL-10highTGF-βhighIL-8high。 EGF刺激MOs后收取的条件培养上清可促进卵巢癌细胞的侵袭、增殖及迁移。第三部分,TAMs中EGFR活化促进EOC恶性行为的机制研究。利用EGFR的单克隆抗体西妥昔单抗(Cetuximab), PI3K抑制剂LY294002和ERK抑制剂PD98095检测不同处理后TAMs分泌IL-10的变化。其次,通过Transwell侵袭实验、MTT增殖实验及单层伤口愈合实验检测抑制TAMs培养上清中IL-10作用的条件培养基对卵巢癌细胞SKOV3侵袭、增殖及迁移能力的影响。结果显示：24h时,EGF (0.00μg/ml-1.0μg/ml)刺激TAMs分泌IL-10存在浓度依赖。在TAMs中,EGF与其受体EGFR结合后可能通过其下游PI3K/AKT和ERK两条信号通路促进IL-10的分泌。并且,含有IL-10的TAMs培养上清液可能通过上调卵巢癌细胞中血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达水平促进卵巢癌细胞的侵袭、增殖和迁移。综上所述,得出以下结论： (1)原发EOC癌组织及腹水中CD163+TAMs的数量及比例与EOC的恶性程度密切相关,表达越高,提示患者的疾病恶性程度越高。 (2)EGF在体外可诱导外周血来源单核细胞分化为具有M2型巨噬细胞特征(CD163highIL-10highTGF-βhighIL-8high的TAMs,并且EGF刺激MOs后收取的条件培养上清可促进卵巢癌细胞的侵袭、增殖及迁移。 (3)EGF与其受体EGFR结合后可能通过其下游PI3K/AKT和ERK两条信号通路促进TAMs分泌IL-10,而且IL-10可能通过上调卵巢癌细胞中VEGF和MMP-9的表达水平促进癌细胞的侵袭、增殖和迁移。
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【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.31

【参考文献】