妊娠小鼠子宫天然淋巴样细胞的鉴定及功能分析

发布时间：2019-05-23 22:44

【摘要】：目的:天然淋巴样细胞(ILCs)是新近发现的天然免疫细胞。根据其表达的转录因子和细胞因子又细分为三个亚群。NK细胞属于第一亚群。有关子宫NK细胞的特征及其在妊娠中的作用已逐渐被确定。NK细胞对于控制滋养层细胞的侵袭,维持妊娠免疫耐受,调节血管重塑以及胎儿-胎盘生长发挥重要作用。近期,研究者分别在人和小鼠的子宫中发现了天然淋巴样细胞家族的其它成员,但是它们在妊娠中的作用仍不明确。本研究通过观察妊娠不同时期小鼠子宫ILCs的比例、数量、分泌细胞因子的水平,清除ILCs后对小鼠正常妊娠的影响以及初步探究在弓形虫感染的异常妊娠中ILCs的功能。方法:将C57小鼠于前一日晚7:00以雌雄鼠比例3:2合笼,次日早7:00观察到阴栓定义为妊娠第0.5天,分别将第6.5、9.5和13.5天定义为妊娠的早期、中期和晚期;通过胶原酶IV消化法分离提取妊娠不同时期小鼠子宫的单个核细胞,荧光抗体标记染色,通过流式细胞仪检测小鼠妊娠不同时期子宫ILCs的比例及数量;液氮研磨法提取妊娠不同时期小鼠子宫组织总RNA,逆转录为cDNA后,通过荧光定量PCR方法检测子宫中相关细胞因子的RNA水平;将分离的子宫单个核细胞进行体外刺激培养后进行细胞内染色,用流式细胞术检测子宫总ILCs产生的细胞因子如IFN-γ,IL-5,IL-13,IL-17和IL-22的水平;采用免疫组化的方法定位了Rag1-/-小鼠子宫中ILCs的分布;使用抗体清除Rag1-/-妊娠小鼠ILCs,流式检测清除效率;通过HE染色法观察ILCs清除后妊娠10.5天小鼠子宫螺旋动脉的变化,以及清除后妊娠16.5天胎儿和胎盘的变化;使用弓形虫感染模型观察ILCs在异常妊娠过程中的变化。结果:在小鼠妊娠早期子宫ILCs的总数出现了明显增加。一类子宫天然淋巴样细胞(ILC1s)的比例和数量在妊娠早期较处女鼠均出现明显增加,ILC1s在妊娠晚期数量也较处女鼠增加;二类子宫天然淋巴样细胞(ILC2s)的绝对数在妊娠各期均增加,在孕早期达到高峰并且是此时子宫ILCs中数量最多的一群。胞内细胞因子检测发现在妊娠早期分泌IFN-γ、IL-5和IL-13的ILCs的比例较处女鼠明显增加。免疫组化定位妊娠中期Rag1-/-小鼠子宫ILCs发现其主要分布在妊娠系膜淋巴细胞集群(MLAP)以及蜕膜基质层。我们发现清除Rag1-/-鼠体内ILCs后,妊娠中期妊娠小鼠胚胎子宫螺旋动脉发育受限。同时我们初步发现在弓形虫感染导致的流产模型中炎性因子IFN-γ、TNF-α的比例明显增高。结论:这些结果说明子宫ILCs在维持小鼠正常妊娠中发挥重要作用。
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【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R714

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本文编号：2484302