【摘要】：第一部分生物可降解高分子的合成 目的 合成可以在体内降解的具有双亲性的生物高分子材料,为后续实验准备载体材料。 方法 1,从带羧基的MPEG-b-P(LA-co-MCC-COOH)出发,通过活化剂二环己基碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(DCC/NHS)活化羧基,再将已活化的羧基与氨基乙醇反应得到侧链含羟基-OH的聚碳酸酯高分子载体MPEG-b-P(LA-co-MCC-OH)。 2,通过MPEG引发己内酯开环得到MPEGG-b-PCL-OH;再依次活化羟基,叠氮根取代活化的端羟基得到MPEG-b-PCL-N3；还原叠氮根得到末端含胺基的MPEG-b-PCL-NH2；再引发赖氨酸NCA聚合,最后脱胺基保护得到侧链含胺基的MPEG-b-PCL-b-PLL。 结果 1,经核磁鉴定,得到了基于聚碳酸酯的两亲性高分子载体,侧链含羟基的聚碳酸酯—聚乙二醇-b-聚(乳酸-co-2-甲基-2-羧基-1,3-丙二醇碳酸酯)分子式为MPEG114-b-P(LA10-co-MCC10)。 2,经核磁鉴定,得到了另外一个基于聚氨基酸的两亲性高分子载体,聚甲氧基聚乙二醇-聚己内酯-聚赖氨酸,分子式为MPEG114-b-PCL20-b-PLL1o。 结论 成功制备了两个双亲性的生物高分子载体。 第二部分生物可降解高分子-铂(Ⅳ)纳米胶束治疗耐药性卵巢癌的研究 目的 制备生物可降解高分子-铂(Ⅳ)纳米胶束研究其治疗固有性耐药的卵巢癌的效用 方法1,将顺铂的四价衍生物cisPt(Ⅳ)-COOH通过酰胺键连接到高分子载体MPEG-b-PCL-b-PLL上,得到高分子-铂(Ⅳ)键合物,并制备成纳米胶束。 2,对该纳米胶束进行表征及体外释放模拟实验 3,MTT实验研究其对卵巢癌耐药细胞SKOV3的杀伤作用 4,原子吸收光谱法对细胞内铂药积聚以及ICP-MS对DNA-铂加合物浓度进行测定 结果 1,高分子-铂(Ⅳ)纳米胶束呈球形,粒径150-160nm左右,zeta电位+6.9mV,铂的载药量能达到13%。 2,高分子-铂(Ⅳ)纳米胶束释放50%的药物,在pH5.0酸性环境下仅需20个小时,在pH7.4时需要40个小时,而在10mM抗坏血酸钠的还原环境下仅需5小时。 3,对于SKOV3细胞,纳米胶束的24小时IC50为5.25ug/ml,顺铂为36ug/ml 4,纳米胶束组细胞内铂浓度是顺铂组的10倍,DNA-铂加合物浓度是顺铂组的3倍。 结论 成功制备了比较理想的纳米胶束,粒径、zeta电位以及载药量都符合要求,并且具有长效循环和降低系统副作用的潜能,其体外抗癌效果优于顺铂,其可能是通过增加细胞内铂的积聚以及DNA-铂加合物的形成。 第三部分生物可降解高分子-环己二胺铂(Ⅱ)纳米胶束治疗耐药性卵巢癌的研究 目的 制备生物可降解高分子-环己二胺铂(Ⅱ)纳米胶束研究其治疗获得性耐药的卵巢癌的效用 方法 1,将奥沙利铂前体化合物DACH-Pt-CL2与聚碳酸酯载体MPEG-b-P(LA-co-MCC)螯合,得到螯合物高分子-DACHPt, P(Pt),再制备成纳米胶束 2,对该纳米胶束进行表征及体外释放模拟实验 3,MTT实验研究其对卵巢癌细胞A2780及其耐药株A2780DDP的杀伤作用 4,原子吸收光谱法对细胞内铂药积聚以及ICP-MS对DNA-铂加合物浓度进行测定 结果 1,高分子-环己二胺铂(Ⅱ)纳米胶束呈球形,粒径30-40左右,zeta电位+13mV,铂的载药量10% 2,高分子-环己二胺铂纳米胶束释放50%的药物,在pH5.0酸性环境下仅需20个小时,在pH7.4时需要100个小时。 3,在亲本株A2780及耐药株A2780DDP中,高分子-环己二胺铂纳米胶束的IC50为5.2uM和15.2uM,都要小于对应的奥沙利铂。 4,高分子-环己二胺铂纳米胶束组细胞内铂浓度以及DNA-铂加合物浓度都要高于奥沙利铂。 结论 1,成功制备了比较理想的高分子-环己二胺铂纳米胶束,体外实验显示对于卵巢癌细胞亲本株以及耐药株,其药效都比对应的奥沙利铂好,其可能机制是纳米胶束增加了药物进入细胞的量。 第四部分生物可降解高分子-铂／利尿酸联合用药纳米胶束的研究 目的 针对肿瘤细胞对铂类药物“解毒”致失活这一耐药机制,我们设计利用一个高分子纳米胶束共同担载利尿酸和铂药的策略,利尿酸抑制GST,从而降低细胞对铂药的解毒作用,起到铂药增敏的左右。 方法 1,通过DCC/DMAP将高分子载体MPEG-b-P(LA-co-MCC)与利尿酸键合,得到高分子-利尿酸键合物P(EA) 2,纳米沉淀法P(EA)及P(Pt)共组装成一个担载两个药物的复合纳米胶束 3,MTT实验研究其对卵巢癌细胞A2780及其耐药株A2780DDP的杀伤作用 4,原子吸收光谱法对细胞内铂药积聚以及ICP-MS对DNA-铂加合物浓度进行测定 5,昆明小鼠H22皮下移植瘤模型研究在体水平抗癌效果及毒性 结果 1,高分子-环己二胺铂／利尿酸复合纳米胶束M(EA/Pt)呈球形,粒径120左右,zeta电位-5.6mV,铂的载药量10%,利尿酸载药量14%,在酸性环境下释放更快。 2,在亲本株A2780及耐药株A2780DDP中,M(EA/Pt)纳米胶束的IC50分别为3.2uM和12.9uM,其数值小于对应的奥沙利铂与利尿酸联合应用。在耐药株A2780中联合指数CI=0.41,也要小于小分子联合的0.53 3,高分子-环己二胺铂复合纳米胶束M(EA/Pt)组细胞内铂浓度要高于小分子联合；DNA-铂加合物浓度没有增加。 4,高分子-环己二胺铂复合纳米胶束M(EA/Pt)能更有效的抑制肿瘤生长,并且没有出现小鼠死亡,而相等剂量的小分子奥沙利铂组的小鼠则在一周内死亡。 结论 本部分成功制备了高分子-环己二胺铂复合纳米胶束M(EA/Pt),其在体内外实验中都显示了优于小分子联合的药效以及安全性。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
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