OSTP增强紫杉醇诱导卵巢癌A2780细胞凋亡作用及其机制的研究

发布时间：2019-07-04 16:46

【摘要】：目的：前期工作中我们首次筛选和鉴定出卵巢癌特异性结合肽（Ovariancancerspecific targeting peptide, OSTP），本实验进一步研究OSTP联合紫杉醇对卵巢癌A2780细胞生长和凋亡的影响及其机制。将对探讨和开发OSTP作为靶向化疗增敏剂治疗卵巢癌奠定实验基础。 方法：体外培养卵巢癌A2780细胞，随机分为溶剂对照组（1640和DMSO组）、OSTP组、紫杉醇组和OSTP联合紫杉醇组；采用四甲基偶氮唑盐（MTT法）检测OSTP对A2780细胞生长的影响及其IC50值；用Annexin-V-FITC和PI双染法标记A2780细胞，应用流式细胞术检测细胞凋亡情况；通过磷酸化蛋白芯片检测信号通路中蛋白的磷酸化水平变化情况；并用Western Blot实验进一步研究信号通路中磷酸化蛋白的表达情况。 结果：MTT法检测结果显示：不同浓度(0.01、0.1、1、10、100umol/L)的OSTP作用于卵巢癌A2780细胞时，其抑制率分别是27.36%、32.68%、36.08%、40.77%、57.32%。与对照组相比差异有统计学意义(P0.01)， OSTP的IC50值为78.18umol/L。应用流式细胞技术检测细胞凋亡发现：不同浓度的OSTP（20、40、80、160、320umol/L）对A2780细胞的凋亡率分别为7.88%、8.35%、8.73%、9.39%、10.68%，与对照组相比差异有统计学意义（P0.01），提示OSTP可诱导细胞凋亡，凋亡作用不是很强。OSTP和紫杉醇联合应用，即分别在OSTP80umol/L0h、3h、6h、12h后再加紫杉醇10umol/L作用于卵巢癌A2780细胞48h，结果发现细胞凋亡率分别是39.40%、53.09%、48.18%和45.62%，均高于OSTP和紫杉醇单独用药及两者的凋亡率相加值，且差异有统计学意义(P0.001)，提示OSTP能增强紫杉醇诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用。磷酸化蛋白芯片检测OSTP联合紫杉醇诱导卵巢癌A2780细胞凋亡中蛋白磷酸化水平的情况。共筛选出42个差异磷酸化位点，31个差异蛋白。其中有11个蛋白的磷酸化水平上调，23个蛋白的磷酸化水平下调。Western Blot进一步研究了其中PI3K/Akt信号通路的两个差异磷酸化蛋白(FoxO1/3/4、14-3-3zeta/delta)的表达情况，结果显示，与对照组相比，，OSTP组、紫杉醇组FoxO1/3/4磷酸化蛋白表达水平降低（P0.01）；与OSTP组、紫杉醇组相比，联合用药组中的FoxO1/3/4磷酸化蛋白表达水平降低（P0.01），差异均具有统计学意义。与对照组相比，OSTP组、紫杉醇组14-3-3zeta/delta磷酸化蛋白表达水平降低（P0.01）；与OSTP组、紫杉醇组相比，联合用药组中的14-3-3zeta/delta磷酸化蛋白表达水平降低（P0.01）；差异均具有统计学意义。 结论： 1. OSTP能增强紫杉醇诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用。 2. OSTP增强紫杉醇诱导卵巢癌A2780细胞凋亡作用，其机制可能与PI3K/Akt信号通路中的关键蛋白FoxO1/3/4和14-3-3zeta/delta磷酸化蛋白表达降低有关。
文内图片：
图片说明：OSTP作用于卵巢癌A2780细胞后的凋亡流式检测图
[Abstract]:Aim: in the previous work, we screened and identified the specific binding peptide (Ovariancancerspecific targeting peptide, OSTP), of ovarian cancer for the first time. The effect of OSTP combined with paclitaxel on the growth and apoptosis of ovarian cancer A2780 cells and its mechanism were further studied. It will lay an experimental foundation for the discussion and development of OSTP as a targeted chemotherapy sensitizer in the treatment of ovarian cancer. Methods: ovarian cancer A2780 cells were randomly divided into solvent control group (1640 and DMSO), OSTP group, taxol group and OSTP combined with paclitaxel group), the effect of OSTP on the growth of A2780 cells was detected by MTT assay, and the apoptosis of A2780 cells was detected by Annexin-V-FITC and PI double staining, and the apoptosis of A2780 cells was detected by flow cytometry. The phosphorylation level of protein in signal pathway was detected by phosphorylation protein chip, and the expression of phosphorylation protein in signal pathway was further studied by Western Blot assay. Results: the results of MTT assay showed that the inhibition rates of different concentrations of OSTP (0.01, 0.1, 1, 10100umol 鈮

本文编号：2510061