胰岛素样生长因子-1介导营养限制所致胎儿生长受限中的胎盘机制初步研究

发布时间：2019-07-17 09:18

【摘要】：研究背景胎儿生长受限(Fetal Growth Restriction,FGR)是指各种不良因素所致胎儿宫内发育潜能不足,新生儿出生体重低于同孕龄平均出生体重的第十百分位数[1],严重威胁着围产儿及新生儿的健康。FGR病因复杂,发病机制尚未完全阐明,临床上对于FGR的诊断手段相对单一,缺乏有效的早期预测、监测指标及有效的治疗措施。已证实,胰岛素样生长因子家族(Insulin Growth Factor System,IGFs)在FGR发病中有重要作用,并可以影响胎盘结构发育和功能[2];胎盘作为妊娠期特有器官,其正常结构和功能对胎儿发育具有关键作用,各种因素导致胎盘功能不足引起母胎间物质交换障碍,可直接影响胎儿生长发育[3]。在早期胎盘植入和形成中,滋养细胞侵袭子宫蜕膜及肌层、完成子宫螺旋动脉重铸,对胎盘形成有重要作用,涉及多个重要蛋白及细胞因子参与,其中基质金属蛋白酶-2(MatrixMetalloproteinase-2,MMP2)是参与滋养细胞侵袭的重要酶类之一,通过降解细胞外基质、破坏基底膜、促进血管表面生长因子生成等促进滋养细胞侵袭与胎盘血管重铸[4]。已证实,孕期营养不良是FGR的确切诱因,可能通过影响胎盘正常结构及功能导致胎儿生长受限[5],但具体发病机制尚未完全阐明。本研究通过营养限制构建FGR大鼠模型,探讨营养限制、胎盘IGF1表达与胎儿发育的关系;进一步在细胞学水平初步探索IGF1对滋养细胞侵袭力的影响。为FGR发病机制研究、早期临床预测及监测等提供理论及实验参考。第一部分 孕期营养限制诱导FGR大鼠模型中胎盘IGF1、IGFBP3 的改变[研究目的]通过孕期营养限制诱导FGR大鼠模型,探讨营养限制对大鼠胎盘IGF1、IGFBP3表达的影响以及其与FGR发病之间的关系。[研究方法]1.首先,通过孕期蛋白饮食限制(8%蛋白)建立营养限制条件,构建FGR大鼠模型,观察营养限制对大鼠子代及胎盘发育的影响;2.HE染色病理学检查观察营养限制对胎盘发育与结构的影响;3.进一步,通过荧光定量PCR检测胎盘IGF1、IGFBP3mRNA表达水平,免疫组化方法检测胎盘IGF1、IGFBP3蛋白表达。[结果]1.孕期营养限制显著抑制胎鼠及胎盘发育,和对照组相比,营养限制组子代GD19.5平均体重显著下降,FGR率升高(P0.05);2.胎盘HE染色病理检查发现,营养限制组大鼠胎盘发育不良,迷路区变薄;3.荧光定量PCR结果显示,和对照组相比,营养限制组胎盘IGF1、IGFBP3 mRNA表达显著下降(P0.05);4.免疫组化结果显示,大鼠胎盘部位IGF1及IGFBP3主要表达于基底层及迷路区滋养细胞胞浆内,和对照组相比,营养限制组胎盘IGF1及IGFBP3表达下调。[结论]孕期营养限制抑制胎鼠及胎盘正常生长发育,导致大鼠胎盘部位滋养细胞IGF1及IGFBP3表达下调,可能影响胎盘正常结构发育从而抑限制胎鼠生长。第二部分 血清限制对人滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞IGF1表达及细胞侵袭力的影响[研究目的]通过胎牛血清(Fetal Calf Serum,FBS)限制干预HTR-8/SVneo细胞模拟整体实验,探讨FBS限制对HTR-8/SVneo细胞IGF1及细胞侵袭力表达的影响。[研究方法]1.分别予低浓度FBS、中等浓度FBS及高浓度FBS处理HTR-8/SVneo细胞,荧光定量PCR检测细胞IGF1、IGFBP3mRNA表达水平,细胞免疫荧光检测HTR-8/SVneo细胞IGF1、IGFBP3蛋白表达,比较不同浓度FBS处理对HTR-8/SVneo 细胞 IGF1、IGFBP3 的影响;2.同前处理,检测不同浓度FBS处理对HTR-8/SVneo细胞MMP2 mRNA及蛋白表达的影响;Transwell小室侵袭实验检测不同浓度FBS对HTR-8/SVneo细胞侵袭力的影响;3.给予不同浓度rhIGF1处理HTR-8/SVneo细胞,CCK-8比色实验法检测rhIGF1对细胞增殖的影响;4.给予rhIGF1处理HTR-8/SVneo细胞48小时后,荧光定量PCR检测细胞MMP2 mRNA表达水平,细胞免疫荧光检测细胞MMP2蛋白表达,Transwell小室侵袭实验检测rhIGF1对细胞侵袭力的影响。[结果]1.FBS限制导致HTR8/SVneo细胞IGF1表达下调(P0.05);2.低浓度FBS导致HTR8/SVneo细胞MMP2低表达(P0.05),细胞侵袭力下降(P0.05);3.rhIGF1能显著上调HTR-8/SVneo细胞MMP2表达水平(P0.05),促进HTR-8/SVneo细胞增殖及侵袭(P0.05)。[结论]FBS限制下调人滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞IGF1表达,可能通过介导细胞MMP2低表达,从而抑制滋养细胞侵袭能力;rhIGF1上调HTR-8/SVneo细胞MMP2表达,促进细胞侵袭力。
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图片说明：图１大鼠阴道细胞涂片生殖周期检查逡逑Ｆｉｇ．邋１邋ｖａｇｉｎａｌ邋ｓｍｅａｒｓ邋ｏｆ邋ｒａｔ邋ｏｎ邋ｅｓｔｒｏｕｓ邋ｃｙｃｌｅ邋ｐｈａｓｅｓ逡逑２．２取材及标本处理逡逑
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图片说明： 图３孕期营养限制导致大鼠胎盘发育不良逡逑相比，实验组胎盘重量（Ａ）、直径（Ｂ）及厚度（Ｃ）减少，＊Ｐ＜０．０５；邋Ｅ像，，和对照组相比，营养限制组大鼠胎盘偏小。Ｆ：胎盘纵切面：ＭＧ．？区，ＢＺ：基底层区，ＬＺ：迷路区。Ｇ：大鼠及其胎盘大体图像比较。逡逑Ｆｉｇ．３邋Ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌ邋ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ邋ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ邋ｌｅａｄｓ邋ｔｏ邋ｐｌａｃｅｎｔａｌ邋ｍａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ邋ｏｆ邋ｒａｓｔａｔｉｏｎａｌ邋ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ邋ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ邋ｇｒｏｕｐ，邋ａｖｅｒａｇｅ邋ｐｌａｃｅｎｔａｌ邋ｗｅｉｇｈｔ邋（Ａ），邋ｄｉａｍｅｔｅ邋（Ｃ）邋ｄｅｃｒｅａｓｅｄ邋ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｔｏ邋ｔｈｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｒｏｕｐ．邋＊Ｐ＜０．０５．邋Ｅ：邋ｐｌａｃｅｎｔａｌ邋ｇｒｏｓｓ邋ａｐｐａｃｅ邋ｓｉｄｅ．邋Ｆ：邋ｇｒｏｓｓ邋ａｐｐｅａｒａｎｃｅ邋ｏｆ邋ｐｌａｃｅｎｔａｌ邋ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ邋ｓｅｃｔｉｏｎ：邋ＭＧ：邋ｍｅｔｒｉａｌ邋ｇｌｏｎｅ；邋ＢＺ：邋ｂａｓａｌ邋ｚｏｎｅ；邋ＬＺ：邋ｌａｂｙｒｉｎｔｈ邋ｚｏｎｅ．邋Ｇ：邋ｇｒｏｓｓ邋ａｐｐｅａｒａｎｃｅ邋ｏｆ邋ｒａｔｓ邋ａｎｄ邋ｔｈｅｉｒｒｅｓｅａｒｃｈ邋ｇｒｏｕｐ邋ａｎｄ邋ｔｈｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｒｏｕｐ．逡逑Ａ邋｜ｉ逡逑
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R714.5

【参考文献】

相关期刊论文 前4条

1 余艳红,王志坚;胎儿生长受限胎盘病理改变与绒毛滋养细胞基质金属蛋白酶9的表达关系[J];中华围产医学杂志;2003年04期

2 王雁玲;;胚胎植入障碍与先兆子痫[J];医学分子生物学杂志;2006年02期

3 罗晓芳;漆洪波;;胎儿生长受限的胎盘因素及其临床诊治[J];中国实用妇科与产科杂志;2016年04期

4 乔娟;漆洪波;;胎儿生长受限:更新的认识[J];中华围产医学杂志;2015年06期

本文编号：2515392