人子宫内膜异位症异位及在位内膜间质细胞分离与培养

发布时间：2019-09-19 22:23

【摘要】：目的建立子宫内膜异位症(EMs)异位、在位内膜间质细胞的体外细胞模型,实时观察间质细胞形态变化。方法胶原酶消化异位、在位内膜组织,二次筛网过滤结合低速离心法分离纯化间质细胞,应用免疫细胞化学染色进行细胞鉴定,并进行传代培养,观察细胞生长状况及细胞形态差异。结果培养成功率91.3%,间质细胞纯度达95%;异位间质细胞9代内、在位及对照组间质细胞11代内,细胞形态及活性并无明显改变。结论子宫内膜间质细胞可为子宫内膜异位症研究提供较好的细胞模型。
【图文】：

组内膜间质细胞外观特征相似，悬浮液中呈单个细胞，形态呈圆形或椭圆形；贴壁后呈梭形生长，少部分呈星形生长，细胞质薄且透明，细胞核圆形居中，细胞平铺生长，无明显极性。细胞培养过程中见异位间质细胞比在位、正常细胞稍大，形态仍是梭形或星形。２．３间质细胞生长情况分离的内膜间质细胞３０ｍｉｎ后部分细胞开始贴壁，２４ｈ后大部分间质细胞已贴壁。在位、对照组间质细胞生长速度较快，２～３ｄ传代１次；异位间质细胞生长速度相对较慢，４～５ｄ传代１次（细胞传代后生长形态见图１）。在位、对照组间质细胞１１代内，异位间质细胞９代内，细胞形态及活性并无明显改变，若继续传代，发现细胞形态增大，胞质中含有颗粒，细胞出现崩解现象，在相同的消化条件下，裂解的细胞数目较多。２．４间质细胞鉴定间质细胞表面特异性标志分子为波形蛋白，腺上皮细胞的特异性标志分子为细胞角蛋白。细胞化学染色结果示：内膜间质细胞波形蛋白阳性着色（棕黄色），角蛋白及空白对照未着色，间质细胞纯度达９５％（图２）。Ａ：对照组；Ｂ：异位组；Ｃ：在位组。图１各组间质细胞传代后生长形态Ａ：波形蛋白组；Ｂ：角蛋白组；Ｃ：空白组。图２各组细胞化学免疫鉴定结果２０８５重庆医学２０１５年５月第４４卷第１５期
【作者单位】： 江西省妇幼保健院;
【基金】：江西省自然科学基金资助项目(2012BAB205011)
【分类号】：R711.71

【参考文献】

相关期刊论文 前6条

1 李妍;李迅;;子宫内膜异位症在位内膜腺上皮细胞及基质细胞的分离培养和鉴定[J];解剖科学进展;2008年03期

2 张宏,赵昀,李亚里,田方,王丽;人离体子宫内膜细胞培养方法的建立[J];军医进修学院学报;2002年03期

3 王海燕,薛晓鸥,姜恩魁,戴俊峰;人子宫内膜腺上皮细胞及基质细胞分离方法的研究[J];锦州医学院学报;2003年04期

4 许艳丽;杨卓;陈英汉;王丹波;;人子宫内膜异位症在位内膜间质细胞原代培养方法探讨[J];中国全科医学;2009年18期

5 杨新园;陈葳;李旭;;子宫内膜基质干细胞培养方法的比较研究[J];山西医科大学学报;2011年08期

6 廉红梅;刘义;吕立群;谢伟;;人子宫在位和异位内膜间质细胞的分离纯化和体外培养[J];中国妇幼保健;2010年35期

【共引文献】

相关期刊论文 前10条

1 王欣,成娅,程湘,刘萍,王智,林桂兰;人子宫内膜腺上皮细胞原代培养方法的改进[J];重庆医学;2005年05期

2 张勇法;杨建英;秦翠丽;;小鼠子宫内膜上皮细胞的分离和原代培养[J];重庆医学;2011年22期

3 石书芳,俞超芹,刘玉环,崔英,惠宁;人在位和异位子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞的原代培养[J];第二军医大学学报;2004年11期

4 李俊;孟祥阁;范超群;;新生小鼠子宫内膜上皮层体外分离研究[J];淮北煤炭师范学院学报(自然科学版);2009年03期

5 穆琳;宋静慧;;子宫颈上皮内瘤变与女性生殖道局部免疫[J];中国妇产科临床杂志;2014年06期

6 钱艺美;王小红;邓瑞华;;腹股沟处子宫内膜异位灶一例[J];中国妇产科临床杂志;2015年01期

7 张宏;刘云海;倪和民;杨飞鸽;刘烈琴;郭勇;;不同共培养细胞类型对绵羊孤雌生殖胚发育的影响[J];黑龙江畜牧兽医;2008年05期

8 赵昀 ,张宏,李亚里,魏丽惠,田方,关铮;子宫内膜细胞的培养和侵袭性研究[J];解放军医学杂志;2003年05期

9 方玲;刘欣宇;代娜;姜国云;高小芳;周鸿;刘俊静;佟永领;;月舒滴丸对大鼠子宫内膜及平滑肌细胞OTR表达的影响[J];辽宁中医药大学学报;2014年11期

10 许艳丽;杨卓;陈英汉;王丹波;;人子宫内膜异位症在位内膜间质细胞原代培养方法探讨[J];中国全科医学;2009年18期

相关博士学位论文 前8条

1 赵蕾;痛可舒对实验性子宫内膜异位症局部病灶作用机理的研究[D];黑龙江中医药大学;2007年

2 宋宇轩;兔子宫三维组织片层的构建及其对小鼠胚胎体外发育影响的研究[D];西北农林科技大学;2007年

3 吴庆侠;永生化山羊子宫内膜细胞系的建立[D];西北农林科技大学;2009年

4 黄凤英;GnRHⅡ在子宫内膜异位症患者中的表达及其对离体培养内膜间质细胞的作用[D];中南大学;2009年

5 张硕;子宫内膜异位症合并不孕相关研究及重组人促黄体生成素对辅助生育结局的影响[D];中国人民解放军医学院;2013年

6 单铁英;人子宫内膜的体外构建及Ang-(1-7)和AngⅡ对子宫内膜细胞和子宫内膜组织的影响[D];河北医科大学;2014年

7 林开清;SRA1调节ERs的表达对卵巢子宫内膜异位症生物学行为的影响[D];浙江大学;2014年

8 袁增;卵巢子宫内膜异位症的输卵管上皮细胞起源研究[D];山东大学;2014年

相关硕士学位论文 前10条

1 蔡国青;Epo、VEGF在子宫内膜异位症中作用的研究[D];第四军医大学;2004年

2 王欣;无排卵型功血子宫内膜上皮细胞培养及角质细胞生长因子干预研究[D];第三军医大学;2005年

3 丰艳妮;山羊子宫内膜腺上皮细胞的分离培养及其对猪PBMC的影响[D];西北农林科技大学;2006年

4 王海滨;以Ⅰ型液态胶原为支架构建组织工程化子宫的实验研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年

5 李瑞梅;家兔子宫内膜及平滑肌细胞体外分离及扩增的研究[D];西北农林科技大学;2007年

6 王益兵;序贯共培养体系对小鼠体外受精胚胎发育效果的影响[D];西北农林科技大学;2007年

7 舒美恩;罗氏内异方对子宫异位内膜细胞凋亡、MMPs的影响[D];广州中医药大学;2008年

8 董彬;添加筛选的中药培养液对小鼠体外受精及胚胎发育的影响[D];西北农林科技大学;2008年

9 杨普光;山羊ESC培养上清液对PBMC和PBL的转化及分泌活性的影响[D];西北农林科技大学;2009年

10 何亚琼;以羊膜为载体培养子宫内膜细胞的实验研究[D];中南大学;2010年

【二级参考文献】

相关期刊论文 前8条

1 王欣,成娅,程湘,刘萍,王智,林桂兰;人子宫内膜腺上皮细胞原代培养方法的改进[J];重庆医学;2005年05期

2 王小敏,黄海鹏,何福仙;简易人子宫内膜细胞培养法及其优点[J];赣南医学院学报;2002年03期

3 赵昀 ,张宏,李亚里,魏丽惠,田方,关铮;子宫内膜细胞的培养和侵袭性研究[J];解放军医学杂志;2003年05期

4 张宏,赵昀,李亚里,田方,王丽;人离体子宫内膜细胞培养方法的建立[J];军医进修学院学报;2002年03期

5 吕艳文;王丹波;;子宫内膜异位症发病机制的研究进展[J];中国全科医学;2006年22期

6 谭先杰,刘东远,郎景和,沈铿,冷金花,孙大为,朱兰,刘珠凤,许秀英;子宫内膜腺上皮及基质细胞分离、培养作为子宫内膜异位症体外细胞模型的探索[J];现代妇产科进展;2002年01期

7 郎景和;子宫内膜异位症的研究与设想[J];中华妇产科杂志;2003年08期

8 郎景和;子宫内膜异位症研究的新里程[J];中华妇产科杂志;2005年01期

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 刘娟;任慕兰;;环境激素二恶英与子宫内膜异位症[J];中国妇幼健康研究;2008年05期

2 谭凤岐;谭博;张跃堂;;子宫内膜异位症68例诊治分析[J];河南职工医学院学报;2013年03期

3 朱晓慧;余澎;;子宫内膜异位症研究新进展[J];内蒙古中医药;2013年15期

4 兰远霞;;子宫内膜异位症治疗效果观察[J];临床合理用药杂志;2013年22期

5 冯晓敏;;子宫内膜异位症临床特征及治疗探析[J];中国卫生产业;2013年23期

6 邓莉;;浅谈子宫内膜异位症对生育的影响[J];中国医药指南;2013年23期

7 王洋洋;李佩玲;李琳;张宇虹;赵琳;;子宫内膜异位症相关生物标记物的研究[J];中国优生与遗传杂志;2013年09期

8 朱志洁;徐荣春;陈丽春;;子宫内膜异位症治疗60例临床分析[J];中国现代药物应用;2013年18期

9 王秀英;辨证治疗子宫内膜异位症15例[J];四川中医;2000年11期

10 鱼凤英;手术治疗子宫内膜异位症160例临床分析[J];上海医学;2000年03期

相关会议论文 前10条

1 魏智慧;鲁智惠;;子宫内膜异位症恶变的研究近况[A];全国第八次中医妇科学术研讨会论文汇编[C];2008年

2 庞厚清;杨太珠;罗红;;壁子宫内膜异位症恶变1例[A];中华医学会第十次全国超声医学学术会议论文汇编[C];2009年

3 郑锦丽;;子宫内膜异位症318例治疗的临床分析[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年

4 王凤英;陈亚梅;王树林;;克痛胶囊治疗子宫内膜异位症的实验研究[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年

5 李佶;王大增;张绍芬;徐爱娣;周抗美;李斌;张剑峰;朱丽萍;左瑛;吕海宁;;内异片对子宫内膜异位症的临床疗效[A];全国中医妇科第六次学术研讨会论文汇编[C];2006年

6 牛屹东;冯捷;;双向电泳技术在子宫内膜异位症蛋白质组研究中的应用[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年

7 邓珊;郎和景;;测定血清CA125用于诊断子宫内膜异位症的再评价[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年

8 冷金花;郎景和;;子宫内膜异位症的恶变研究进展[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年

9 肖红梅;;子宫内膜异位症的助孕治疗(Endometriosis and ART)[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年

10 韦溶澄;;子宫内膜异位症的诊断与治疗[A];江苏省抗癌协会妇科肿瘤专业委员会第四次肿瘤学术研讨会暨无锡市妇产科年会论文汇编[C];2005年

相关重要报纸文章 前10条

1 周虹;子宫内膜异位症成为妇科第二大常见病[N];大众卫生报;2007年

2 教授 孙大为;子宫内膜异位症对生育有多大影响[N];卫生与生活报;2008年

3 士平;子宫内膜异位症不可轻视[N];中国妇女报;2000年

4 黄海平 副主任医师;适量运动，，预防子宫内膜异位症[N];大众卫生报;2001年

5 舒楚强;子宫内膜异位症与不孕[N];大众卫生报;2004年

6 兰州现代中医药研所 史建钢;子宫内膜异位症能否根治？[N];甘肃日报;2004年

7 北京朝阳医院妇产科主治医师 李淑红;腹腔镜诊治子宫内膜异位症[N];健康报;2003年

8 健康时报特约记者 吉尔;产后子宫内膜异位症咋治疗？[N];健康时报;2005年

9 梦月;年轻女性健康的威胁——子宫内膜异位症[N];中国劳动保障报;2002年

10 吴凡;张海峰;陈思亮;异位散治疗子宫内膜异位症[N];中国医药报;2004年

相关博士学位论文 前10条

1 王良;蛋白质质谱高通量分析平台的建立及其在子宫内膜异位症中的应用性研究[D];浙江大学;2010年

2 宋楠;子宫内膜异位症疼痛与瞬时受体电位辣椒素亚型-1表达的研究[D];中国协和医科大学;2010年

3 张立会;子宫内膜异位症相关蛋白质组学研究[D];吉林大学;2007年

4 康山;基质金属蛋白酶基因多态性及表达在子宫内膜异位症发病机制中作用的研究[D];河北医科大学;2007年

5 郭广宏;子宫内膜异位症相关生物标志研究及辅助诊断模型的建立[D];中国人民解放军医学院;2013年

6 陈琼华;脂氧素对子宫内膜异位症抑制作用的研究[D];华中科技大学;2011年

7 苑春莉;胰岛素样生长因子系统与子宫内膜异位症[D];吉林大学;2004年

8 郑辉;子宫内膜异位症异位内膜的实验研究[D];暨南大学;2002年

9 艾星子·艾里;新疆维、汉民族子宫内膜异位症相关差异基因及蛋白的初探和内异症相关因子的研究[D];新疆医科大学;2006年

10 王艳艳;子宫内膜异位症组织中神经纤维的分布及其与疼痛的关系[D];中国协和医科大学;2009年

相关硕士学位论文 前10条

1 胡芬;子宫内膜异位症的蛋白质组学研究[D];复旦大学;2008年

2 徐珍珍;缺血/缺氧预处理对子宫内膜异位症鸡胚模型血管生成的影响[D];苏州大学;2009年

3 张璇;腹腔镜配合自拟逐瘀汤治疗血瘀型子宫内膜异位症的临床观察[D];福建中医学院;2009年

4 郑颖惠;莪棱胶囊干预子宫内膜异位症内膜粘附作用机制研究[D];广州中医药大学;2011年

5 鲁东红;肿瘤坏死因子基因多态性与子宫内膜异位症的相关性分析[D];浙江大学;2005年

6 郭岩;内异汤治疗子宫内膜异位症的临床研究[D];黑龙江中医药大学;2005年

7 王宇翮;核因子κB在子宫内膜异位症中的表达和意义[D];四川大学;2004年

8 蔡珠华;子宫内膜异位症临床数据库的建立与相关研究[D];第一军医大学;2005年

9 于达克;人重组干扰素-α-2b对子宫内膜异位症模型鼠治疗效果的研究[D];天津医科大学;2006年

10 谭萍;子宫内膜异位症药物治疗的探讨[D];吉林大学;2007年

本文编号：2538377