蜕膜细胞通过上调滋养细胞基质金属蛋白酶的表达促进其迁移的作用研究

发布时间：2019-09-30 10:02

【摘要】：目的：胚胎植入子宫内膜是妊娠建立的初始过程和胚胎持续发育的关键。胚胎植入及早期妊娠时,母胎界面位于与滋养层直接接触的蜕膜上。人类的成功妊娠需要来自胎儿的滋养层细胞对子宫基质的有节制地侵入。滋养细胞通过降解细胞外基质使得其能够浸润生长,这一过程需要基质金属蛋白酶MMPs及其天然的抑制剂TIMPs处于一个平衡状态。滋养细胞的侵入作用与其周围环境有着密切的联系,其中子宫蜕膜组织对其的影响尤为重要。然而,子宫蜕膜细胞对滋养细胞的迁移作用和具体分子过程还有待于进一步研究。本研究观察蜕膜细胞条件培养液对滋养细胞迁移能力及相关调节基因(如MMPs、TIMPs等)表达的影响。方法：我们利用原代培养细胞技术,培养人蜕膜细胞以及人子宫内膜间质细胞,并对细胞进行免疫荧光染色,检测细胞的上皮细胞分子标记角蛋白(Cytokeratin,CK)和间质细胞分子标记波形蛋白(Vimentin),以确定原代培养是否成功。我们用收集到的两种细胞的条件培养液(分别命名为DSC-CM和EMC-CM),对滋养细胞癌JAR分别进行预处理,通过Transwell比较两种处理对滋养细胞迁移能力的作用,并通过Q-PCR和Western blot比较两者的MMPs和TIMPs表达水平的区别。结果：应用细胞免疫荧光染色鉴定体外培养的蜕膜和子宫内膜间质细胞,我们发现95%以上的细胞为波形蛋白阳性,仅极少数细胞为角蛋白阳性细胞(5%以下),证明我们的原代培养确实得到了人蜕膜细胞和人子宫内膜间质细胞。Transwell结果显示, DSC-CM处理组的滋养细胞穿出小室的细胞数大于EMC-CM处理组和空白组,我们的结果提示DSC-CM具有促进滋养细胞迁移的作用。Q-PCR结果显示,DSC-CM处理组的滋养细胞MMP2和MMP9mRNA的表达水平显著高于EMC-CM处理组；而TIMP1和TIMP2mRNA在两组间无明显差异。Western blot结果提示DSC-CM处理组的滋养细胞MMP2的表达高于EMC-CM处理组。结论：结果显示：与人子宫内膜间质细胞相比,早孕期蜕膜间质细胞条件培养基DSC-CM能促进滋养细胞的迁移,并上调MMP9和MMP2的表达；而TIMP1和TIMP2mRNA表达变化不明显；提示DSC-CM可能通过促进滋养细胞MMP2和MMP9的表达,从而促进细胞的迁移。
【图文】：

梭形,细胞,蜕膜细胞,硕士学位论文

浙江大学硕士学位论文文一结果3.结果3.1原代培养人蜕膜细胞以及人子宫内膜细胞培养24小时后细胞贴壁达高峰，显微镜下观察贴壁细胞形态，DSC多数呈梭形，少数呈三角形，细胞间平行或放射排列，细胞之间较独立，，核呈圆形；EMC见有细胞呈漩祸排列致密细胞集落，梭形状细胞插入性生长（图1)

子宫内膜间质细胞,间质细胞,条件培养基,滋养细胞

图2.子宫内膜间质细胞和税膜间质细胞近95% Vimentin阳性EMC, Endometrium mesenchymal cell;DSC, Decidual stromal cell;BW, Black/white3.3 DSC-CM条件培养基诱导滋养细胞形态改变细胞条件培养基处理滋养细胞JAR,诱导时间为48小时，观察细胞形态的变化，提示与EMC-CM对照组相比，DSC-CM组细胞由连接紧密的卵圆形转变为分布松散的梭形（图3)。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R711.71

【共引文献】