雌激素诱导子宫内膜癌细胞产生VEGF、bFGF激活MAPK信号传导通路研究

发布时间：2019-11-01 23:30

【摘要】：子宫内膜癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，发病率在世界范围内有上升趋势。无孕激素拮抗的高雌激素长期刺激是目前公认的发病机制之一，但具体发病机制无确切的结论。无限增殖是肿瘤细胞主要特征之一，血管形成是肿瘤生长主要特点，两者与肿瘤的发生发展密切相关。本课题前期研究表明，雌激素可以通过Akt激活NF-κB信号传导通路促进子宫内膜癌细胞产生细胞因子VEGF、bFGF、IL-8，从而促进子宫内膜癌细胞的发展发生。为进一步阐明子宫内膜癌的发病机制，本研究使用两种ER表达不同的子宫内膜癌细胞株，分别检测雌激素刺激、受体抑制剂和通路受体抑制剂作用子宫内膜癌细胞后，细胞生长、增殖、凋亡等变化及细胞因子的表达变化对MAPK信号传导通路的影响，进一步研究细胞因子产生与MAPK信号传导通路的关系。第一章雌激素诱导子宫内膜癌细胞产生VEGF、bFGF因子激活MAPK通路目的探讨雌激素受体（ER）调控雌二醇诱导子宫内膜癌细胞生成血管因子激活有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号传导通路。方法采用不同浓度雌二醇作用子宫内膜癌Ishikawa和HEC-1A细胞，检测ERK1/2蛋白磷酸化水平；再分别以10-6mol/L E（2E2组）、VEGFR受体抑制剂BIBF1120（BIBF1120组）、FGFR受体抑剂Ponatinib（Ponatinib组）和特异性MAPK通路阻断剂U0126（U0126组）作用细胞，应用RT-PCR及Western blot分别检测细胞中血管因子及MAPK通路中mRNA及蛋白表达情况。结果10-6mol/LE2对Ishikawa和HEC-1A细胞的ERK1/2蛋白磷酸化最明显(P0.05)；E2组Ishikawa和HEC-1A细胞中VEGF mRNA及蛋白表达高于对照组(P0.05)，Ishikawa、HEC-1A细胞中E2组RAF、MEK1、ERK1/2mRNA及蛋白显著高于对照组(P0.05)；BIBF1120组、U0126组Ishikawa和HEC-1A细胞中MEK1、ERK1/2基因及蛋白表达低于E2组(P0.05)。结论E2通过诱导子宫内膜癌细胞产生VEGF、bFGF细胞因子激活MAPK信号传导通路。第二章雌激素诱导子宫内膜癌细胞产生VEGF、bFGF因子激活MAPK通路细胞功能实验目的探讨雌激素受体（ER）调控雌二醇诱导子宫内膜癌细胞生成血管因子激活有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号传导通路。方法以10-6mol/L E2（E2组）、VEGFR受体抑制剂BIBF1120（BIBF1120组）、FGFR受体抑剂Ponatini（bPonatinib组）和特异性MAPK通路阻断剂U012（6U0126组）作用Ishikawa和HEC-1A细胞，然后进行细胞生长曲线、集落形成实验、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡、细胞迁移实验。结果10-6mol/LE2作用Ishikawa和HEC-1A细胞的后，，Ishikawa和HEC-1A细胞E2组增殖数增多、细胞周期加快、凋亡减少、细胞迁移数增多（P均0.05），BIBF1120组、Ponatinib组和U0126组Ishikawa增殖数减少、细胞周期减慢、凋亡增加、细胞迁移数减少（P均0.05）。结论E2可以增强子宫内膜癌细胞增殖、迁移能力与VEGF、bFGF有关，由MAPK信号传递通路介导的。
【图文】：

细胞,情况,宫内膜癌,子宫内膜癌

图 1-1 不同浓度 E2激活 Ishikawa 和 HEC-1A 细胞 p-ERK1/2 活化情况ig 1-1 Dose-dependent activation of Erk1/2 by estrogen.Cells were treated with different concentrationsmol/L) of estrogen as indicated for 30 min in Ishikawa and HEC-1A. The relative ratio of phosphorylatedrk1/2: total Erk1/2 are shown in the bar diagram. *p < 0.05 vs. control in Ishikawa; **p < 0.05 vs.E2inEC-1A.(A) Expression of p-Erk1/2, Erk and Erk1/2 kinase activity in Ishikawa; (B) Expression of-Erk1/2, Erk and Erk1/2 kinase activity in HEC-1A;(C) bar diagram of the ratios of p-Erk:total Erk in thewo endometrial cancer cells..2 MTT 测 BIBF1120、Ponatinib 对子宫内膜癌 Ishikawa 和 HEC-1A 细胞C50 影响分别应用不同浓度 100nmol/L，101nmol/L，102nmol/L，103nmol/L，04nmol/L，105nmol/L BIBF1120、Ponatinib 培养子宫内膜癌 Ishikawa 和EC-1A 细胞 24h。MTT 检测各组细胞增殖结果提示，随着 BIBF1120 剂量

宫内膜癌,细胞,细胞增殖

Ishikawa 和 HEC-1A 细胞增殖率下降 IC50 为 3.16μΜ，HEC-1A 细胞 IC50 为 1.95μΜ，表明kawa 和 HEC-1A 细胞增殖，且呈剂量依赖性，HE胞敏感(图 1-3，表 1-6)。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.33

【参考文献】