【摘要】：目的:通过对自噬相关蛋白P62、Beclin-1、LC-3在宫颈组织中表达的研究,旨在探索在宫颈癌发生、发展过程中可能的分子生物学机制,同时可能为宫颈癌的靶向治疗提供参考。方法:1.选取2015年1月至2017年1月就诊于山西医科大学第二医院妇产科,经手术治疗或阴道镜活组织检查后获取的宫颈组织,共90例,其中60例经病理确诊为宫颈鳞状细胞癌为观察组,30例经病理诊断除外宫颈癌前期病变及宫颈癌的正常宫颈组织者为对照组(按照随机数字表选取病例)。2.选取上述90例由我院病理科存档的病理切片,行免疫组化法,定性检测上述切片中P62、Beclin-1和LC-3的表达;3.选取来源于上述90例患者的保存于液氮中的宫颈组织,使用蛋白裂解液提取所需蛋白,应用Western Blot方法在蛋白水平上定量检测P62、Beclin-1和LC-3的表达量;4.采集观察组中患者的年龄、临床分期、是否有盆腔淋巴转移、肿瘤直径大小、肿瘤分化程度等相关信息,分析上述三项指标在各临床特征中表达的差异性,其中临床分期根据2009年制定的国际妇产科联盟(FOGO)指南,由两位经验丰富的高年资妇产医师共同进行诊断;5.采用SPSS18.0统计分析软件进行数据分析:P62、Beclin-1和LC3的相对表达量使用均数±标准差表示;观察组和对照组中P62、Beclin-1和LC3表达的差异性检验采用卡方检验;P62、Bclin-1和LC3之间相关性分析采用Spearman检验;p62、beclin-1和lc-3在观察组患者各临床特征间表达的差异采用卡方检验;采用kappa检验用于beclin-1、lc3在免疫组化结果中阳性率及阴性率表达的一致性分析;检验水准α=0.05,p0.05差异具有统计学意义。结果:1.免疫组化检测p62、beclin-1及lc-3是否表达,结果显示:p62的表达主要在细胞质中,在两组中表达的阳性率比较结果如下:对照组36.7%(11/30)、观察组68.3%(41/60),表达差异具有统计学意义(p0.05);beclin-1的表达在细胞质及细胞膜中,主要在胞膜中,在两组中表达的阳性率比较:对照组76.7%(23/30)、观察组28.3%(17/60),表达差异具有统计学意义(p0.05);lc-3的表达主要在在细胞质与细胞核中,细胞膜中极少表达,在两组中表达的阳性率比较:对照组73.3%(22/30)、观察组35.0%(21/60),表达差异具有统计学意义(p0.05)。2.westernblot方法检测p62、beclin-1及lc-3蛋白表达量,结果显示:p62蛋白的相对表达量在两组中分别为:对照组(0.289±0.021)、观察组(0.563±0.031);beclin-1的相对表达量为:对照组(0.547±0.063)、观察组(0.310±0.018);lc-3的相对表达量为:对照组(0.679±0.063)、观察组(0.303±0.024)。三种蛋白在对照组及观察组中表达的差异性均具有统计学意义(p0.05)。3.p62在肿瘤直径4cm及≤4cm组中的阳性表达率分别为64.3%(18/28)、65.6%(21/32),差异具有统计学意义(p0.05);在不同组织分化程度中的阳性表达率分别为:高分化组57.1%(15/28)、中分化组94.7%(18/19)、低分化组84.6%(11/13),差异具有统计学意义(p0.05)。beclin-1在是否有盆腔淋巴结转移组的阳性表达率分别为:有9.09%(1/11)、无44.8%(22/49),差异具有统计学意义(p0.05);在不同组织分化程度中的阳性表达率分别为:高分化组60.7%(17/28)、中分化组26.3%(5/19)、低分化组0%(0/13),差异具有统计学意义(p0.05)。lc-3在肿瘤直径4cm及≤4cm组中的阳性表达率分别为60.7%(17/28)、71.9%(23/32),差异具有统计学意义(p0.05);在是否有盆腔淋巴结转移组的阳性表达率分别为:有18.2%(2/11)、无42.9%(21/49),差异具有统计学意义(P0.05);在不同组织分化程度中的阳性表达率分别为:高分化组60.7%(17/28)、中分化组15.8%(3/19)、低分化组15.4%(2/13),差异具有统计学意义(P0.05);在临床分期I-IIA期及IIB-IV期的阳性表达率分别为:47.6%(20/42)、16.7%(3/18),差异具有统计学意义(P0.05)。4.采用Spearman对三项指标进行相关性分析:P62与Beclin-1及LC-3的表达无明显关联性(r=-0.312 P=-0.071;r=-0.276 P=0.067);Beclin-1与LC-3表达呈正相关(r=0.443 P0.05)。采用Kappa检验对免疫组化实验中的Beclin-1及LC-3的表达结果进行一致性分析:Kappa=0.548,提示在不同组织中,Beclin-1的阳性表达率及阴性表达率与LC-3的表达率有较高的一致性。结论:1.P62在观察组中表达量均上调,而Beclin-1与LC-3则与之相反,从定量及定性水平,说明在宫颈癌中可能存在自噬活性降低。2.P62在宫颈癌的肿瘤直径大小、组织分化程度中表达具有差异性;Beclin-1在是否有盆腔淋巴转移及肿瘤组织的分化程度中表达具有差异性;LC-3在肿瘤直径的大小、是否有盆腔淋巴转移、肿瘤组织的分化程度及宫颈癌的临床分期中表达具有差异性,说明自噬活性的调节可能在宫颈癌的发展过程中起到一定作用。3.P62、Beclin-1和LC-3的蛋白表达的相关性及一致性分析:P62与Beclin-1及LC-3的表达无明显关联性;Beclin-1与LC-3表达呈正相关,其中在不同组织中Beclin-1的阳性表达率及阴性表达率与LC-3的表达率有较高的一致性。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.33
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