内质网应激对碳离子辐射HeLa细胞应答的影响研究

发布时间：2019-11-13 04:09

【摘要】：目的： 探讨内质网应激对HeLa细胞碳离子辐射应答的影响及可能机制。 材料与方法： 利用内质网应激诱导剂二硫苏糖醇诱导HeLa细胞发生内质网应激反应,MTT法分析不同浓度二硫苏糖醇对HeLa细胞存活的影响。用不同剂量的碳离子辐照二硫苏糖醇预处理的HeLa细胞,用细胞克隆形成实验分析细胞存活,用流式细胞术分析细胞周期分布及细胞凋亡率,用细胞衰老β-半乳糖苷酶检测试剂盒检测细胞衰老,用荧光显微镜及流式细胞仪观察并检测细胞酸性自噬泡和自噬相关蛋白Beclin1的表达,用常规制片法评估染色体畸变情况。并用自噬抑制剂3-MA研究了碳离子辐射诱导的自噬对HeLa细胞存活的影响。 结果与结论： (1)我们的研究结果表明,单独碳离子辐照可以使HeLa细胞存活率下降,并导致G2/M期和凋亡细胞显著增加。我们还发现碳离子辐照后AVO阳性细胞和Beclin1蛋白质表达水平的都升高了,提示在HeLa细胞中有自噬发生。此外,碳离子辐照后HeLa细胞发生衰老现象。 (2)当加入自噬抑制剂3-MA后,酸性自噬泡细胞阳性率显著减少,自噬相关蛋白Beclin1的表达下降,表明自噬受到抑制。与单独辐照组相比,3-MA联合碳离子辐照引起了显著的G2/M期阻滞和细胞凋亡,表明自噬对细胞遭受的碳离子辐射起到保护效应,3-MA具有辐射增敏作用。 (3)二硫苏糖醇可以增加碳离子辐照引起的细胞死亡,降低克隆存活率,提示二硫苏糖醇具有明显的辐射增敏作用；与单独辐照组相比,二硫苏糖醇联合碳离子辐照引起了显著的G2/M期阻滞和细胞凋亡；而且,联合处理组中有明显的细胞衰老现象。同时我们还发现,与单独碳离子辐照组相比,加入二硫苏糖醇后酸性自噬泡阳性细胞率和自噬相关蛋白Belcin1表达水平都明显上升,提示二硫苏糖醇联合碳离子辐照作用后细胞自噬被明显激活。此时在联合作用组中出现更多的衰老细胞和染色体畸变。 结果表明：持续的内质网应激改变了宫颈癌HeLa细胞对碳离子的辐射反应,有效增强HeLa细胞死亡,抑制其增殖活性,细胞自噬性细胞死亡、衰老和遗传损伤可能是联合处理增强HeLa细胞死亡的重要机制。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.33

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 刘秀华，陈魁，武旭东，，张钧华，徐成斌，苏静怡，唐朝枢;缺血预处理的普遍性[J];北京医科大学学报;1996年03期

2 李晓雯;周梅;沈]斀

本文编号：2560119