不良心理应激通过EGFR及其下游信号通路影响人卵巢癌荷瘤裸鼠肿瘤发生、发展的实验研究

发布时间：2017-03-20 03:04

  本文关键词：不良心理应激通过EGFR及其下游信号通路影响人卵巢癌荷瘤裸鼠肿瘤发生、发展的实验研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景与目的:卵巢癌是女性生殖器常见的恶性肿瘤,与宫颈癌、子宫内膜癌合并称女性生殖器三大恶性肿瘤。由于卵巢在盆腔的位置较深,大部分卵巢癌患者在有症状被确诊的时候已发展到疾病晚期,且该疾病具有易转移、易广泛播散,易对化疗药物发生耐药等特点,使其死亡率高,在妇科恶性肿瘤中排第一。近些年来,由于医学模式的转换,心理与肿瘤的关系、心理干预运用于肿瘤治疗等研究逐渐成为医学研究所关注的重点。通过对现有文献报道的分析,不良心理应激在卵巢癌发生、发展过程中起关键性作用,其内在机制不完全清楚。前期研究提示EGFR及其介导的下游信号通路的异常激活可以促进肿瘤细胞增殖、促进肿瘤血管形成、病灶转移并减少肿瘤细胞凋亡,与卵巢癌的发生、发展密切相关,其中PI3K/AKT通路及Ras/Raf/MEK/ERK通路是EGFR下游两条主要的信号通路。迄今为止,关于不良心理应激可促进卵巢癌密切相关信号通路的激活,并且通过这些通路的激活促进肿瘤的发生、发展的相关研究国内外暂无报道。本研究试图通过建立人卵巢癌荷瘤裸鼠皮下移植瘤模型,探讨不良心理应激是否通过EGFR及其下游信号通路影响人卵巢癌肿瘤的发生、发展,为卵巢癌心理治疗及分子靶向治疗提供新思路。研究方法:购置鼠龄4~6周龄的雌性BALB/C(nu/nu)裸鼠,称重,随机分两组,每组12只。A组:荷瘤组—皮下移植人卵巢癌组织瘤块,不给予应激。B组:荷瘤+应激组—皮下移植人卵巢癌组织瘤块,给予应激。构建不良心理应激人卵巢癌荷瘤裸鼠皮下移植瘤模型。定期观察裸鼠的生存状态、裸鼠皮下肿瘤的生长,测量肿瘤结节的最长径(a)及最短径(b),描绘肿瘤生长曲线图。结束应激后第二天,处死全部裸鼠(A组、B组),剥取肿瘤称重,比较A、B两组裸鼠生存状态、裸鼠重量、皮下移植瘤的体积及重量,通过免疫组化染色、Western blot实验方法检测A、B两组皮下移植瘤组织中EGFR、AKT/ρ-AKT、ERK/ρ-ERK、VEGF蛋白表达情况。结果:1、成功构建不良心理应激人卵巢癌荷瘤裸鼠皮下移植瘤模型。2、不良心理应激对卵巢癌荷瘤裸鼠生存状态、重量及皮下移植瘤体积、重量的影响:(1)与荷瘤组裸鼠相比,荷瘤+应激组裸鼠饮食、活动、精神状态较差。(2)荷瘤组实验后裸鼠体重较实验前明显增加(P0.01),荷瘤+应激组实验后裸鼠体重有所降低。实验后荷瘤+应激组裸鼠体重明显低于荷瘤组(P0.01)。(3)实验后荷瘤+应激组皮下移植瘤体积明显大于荷瘤组(P0.01),荷瘤+应激组皮下移植瘤生长速度明显大于荷瘤组。(4)实验后荷瘤+应激组皮下移植瘤重量明显高于荷瘤组(P0.01),荷瘤+应激组皮下移植瘤生长速度明显大于荷瘤组。3、免疫组化染色检测荷瘤组与荷瘤+应激组中EGFR、AKT/ρ-AKT、ERK/ρ-ERK、VEGF蛋白表达情况:荷瘤+应激组皮下移植瘤组织石蜡切片中EGFR、AKT/ρ-AKT、ERK/ρ-ERK、VEGF蛋白免疫组化评分明显高于荷瘤组(P0.05),VEGF表达差异最显著(P0.01)。4、Western blot检测荷瘤组与荷瘤+应激组中EGFR、AKT/ρ-AKT、ERK/ρ-ERK、VEGF蛋白表达情况:荷瘤+应激组皮下移植瘤组织中EGFR、AKT/ρ-AKT、ERK/ρ-ERK、VEGF蛋白表达较荷瘤组明显增加(P0.01)。结论:不良心理应激可能通过EGFR及其下游信号通路促进人卵巢癌荷瘤裸鼠肿瘤的发生发展。
【关键词】：不良心理应激 EGFR PI3K/AKT Ras/Raf/MEK/ERK 信号通路 卵巢癌
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文缩略词表10-12
• 第1章 引言12-16
• 第2章 资料与方法16-27
• 2.1 实验材料16-19
• 2.1.1 实验动物16
• 2.1.2 实验卵巢癌组织16
• 2.1.3 主要试剂与材料16-17
• 2.1.4 主要仪器设备17-19
• 2.2 主要试剂的配制19-21
• 2.2.1 HE、免疫组化染色相关试剂配制19-20
• 2.2.2 Western blot主要相关试剂的配制20-21
• 2.3 实验方法21-26
• 2.3.1 裸鼠的分组21
• 2.3.2 人卵巢癌荷瘤裸鼠模型的构建21-22
• 2.3.3 不良心理应激模型的建立22
• 2.3.4 肿瘤生长的观察和测量22
• 2.3.5 皮下移植瘤组织取材及处理22-23
• 2.3.6 皮下移植瘤组织HE染色、病理鉴定23
• 2.3.7 皮下移植瘤组织免疫组化染色23-25
• 2.3.8 皮下移植瘤组织Western blot实验25-26
• 2.4 统计学处理26-27
• 第3章 结果27-35
• 3.1 成功构建人卵巢癌荷瘤裸鼠皮下移植瘤模型27
• 3.2 两组裸鼠皮下移植瘤组织HE染色结果27-28
• 3.3 两组裸鼠生存状态的比较28
• 3.4 两组裸鼠体重的比较28-29
• 3.5 不良心理应激对皮下移植瘤生长的影响29-30
• 3.5.1 不良心理应激对皮下移植瘤瘤体体积的影响29-30
• 3.5.2 不良心理应激对皮下移植瘤瘤体重量的影响30
• 3.6 免疫组化染色检测荷瘤组与荷瘤组+应激组中EGFR、AKT、ρ-AKT、ERK、ρ-ERK、VEGF蛋白表达情况30-33
• 3.7 Western blot检测荷瘤组与荷瘤+应激组中EGFR、AKT、ρ-AKT、ERK、ρ-ERK、VEGF蛋白表达情况33-35
• 第4章 讨论35-43
• 4.1 卵巢癌概述35
• 4.2 不良心理应激与卵巢癌35-37
• 4.3 人卵巢上皮癌荷瘤裸鼠不良心理应激模型的建立37-39
• 4.4 VEGF与卵巢癌39-40
• 4.5 EGFR及其下游信号通路与卵巢癌40-43
• 第5章 结论与展望43-44
• 致谢44-45
• 参考文献45-51
• 攻读学位期间的研究成果51-52
• 综述52-62
• 参考文献58-62

【参考文献】

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本文编号：257030