CC1007靶向HDAC4复合物调节STAT1逆转卵巢癌顺铂耐药的研究

发布时间：2020-03-15 02:05

【摘要】：目的： 研究新型Ⅱa类HDAC抑制剂CC1007能否增强人卵巢癌细胞株HO8910、SKOV3、SKOV3/DDP对顺铂的敏感性及产生逆转耐药的作用,并初步探讨CC1007靶向HDAC4复合物调节STAT1活性逆转卵巢癌顺铂耐药的可能机制。 方法： 1.采用体外诱导的方式,取对数生长期SKOV3细胞在含顺铂的培养液中培养,逐渐增加药物浓度,诱导出耐药细胞株SKOV3/DDP。 2.MTT比色法检测不同药物组干预HO8910、SKOV3、SKOV3/DDP细胞24h、48h、72h后细胞生长抑制率,实验分组设立空白组、对照组、单用顺铂组、单用CC1007组、顺铂联合CC1007组,计算半数抑制浓度(IC50),并绘制浓度-抑制率图形及时问-抑制率图形。实验重复3次。 3.蛋白质印迹法分析不同药物组处理前后HDAC4、STAT1、pSTAT1的表达情况。实验重复3次。 4.实验所得数据应用SPSS17.0统计学软件进行统计学分析,P0.05表示有统计学意义,统计方法使用单因素方差分析、直线回归分析及t检验。 结果： 1.对SKOV3细胞经过顺铂诱导,获得在顺铂浓度为2.0ug/ml培养基中良好生长的SKOV3/DDP细胞株,耐药指数RI=耐药细胞IC50/亲本细胞IC50=10.251(ug/ml)/3.081(ug/ml)=3.33。 2.MTT比色法检测：(1).单用CC1007组：H08910细胞48h半数抑制浓度IC50为10.831±1.035μM,SKOV3细胞48h半数抑制浓度IC50为60.462±1.781μM, SKOV3/DDP细胞48h半数抑制浓度IC50为28.355土1.453μM。(2).单用顺铂组：H08910细胞24h半数抑制浓度IC50为5.492ug/ml,48h IC50为1.207ug/ml,72h IC50为0.762ug/ml; SKOV3细胞24h半数抑制浓度IC50为5.161ug/ml,48h IC50为3.081ug/ml,72h IC50为2.570ug/ml; SKOV3/DDP细胞24h半数抑制浓度IC50为32.817ug/ml,48hIC50为10.251ug/ml,72h IC50为6.470ug/ml。顺铂对三种卵巢癌细胞的抑制率呈明显浓度和时间依赖关系,三种卵巢癌细胞对顺铂敏感程度依次为：HO8910SKOV3SKOV3/DDP细胞。(3).顺铂联合CC1007组：5μM CC1007联合顺铂对H08910细胞48h顺铂半数抑制浓度IC50为0.476ug/ml;10μM CC1007联合顺铂对SKOV3细胞48h顺铂IC50为1.81ug/ml;10μM CC1007联合顺铂对SKOV3/DDP细胞48h顺铂IC50为3.572ug/ml。顺铂联合CC1007与单用顺铂两种用药方式比较差异有统计学意义(P0.05),低剂量CC1007对三种卵巢癌细胞HO8910、SKOV3、SKOV3/DDP的顺铂增敏作用显著。 3.蛋白质印迹法分析：(1).STAT1基础表达量与三种细胞顺铂的IC50呈正相关；·(2).HDAC4表达水平与卵巢癌细胞顺铂耐药性呈正相关,耐药株SKOV3/DDP较其亲本株SKOV3的HDAC4表达量有所增加；(3).三种卵巢癌细胞中p-STAT1基础表达量均不高,顺铂作用下,HDAC4低表达的H08910中p-STAT1表达量无明显改变,HDAC4高表达的SKOV3/DDP中p-STAT1表达量明显增加,CC1007抑制了顺铂诱导的p-STAT1表达增加,在HDAC4高表达的SKOV3/DDP中抑制作用最显著。 结论： 1.低剂量CC1007能明显增强HO8910、SKOV3对顺铂的敏感性,且一定程度上逆转了耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性。 2. HDAC4表达水平与卵巢癌细胞的顺铂敏感性呈负相关,卵巢癌的顺铂耐药性与HDAC4高表达从而激活STAT1(p-STAT1表达增加)相关。 3.CC1007能靶向HDAC4复合物,抑制HDAC4复合物介导的STAT1激活,发挥逆转卵巢癌顺铂耐药的作用。
【图文】：

SK0V3/DDP图5三种细胞HDAC4基础表达量，两两比较P<0.05，，有统计学意义3.2.3三种细胞不同药物分组P-STAT1表达Western blot法检测H08910、SKOV3、SK0V3/DDP三种细胞不同药物分组P-STAT1表达量，（3-actin作为内参。结果显示，三种细胞p-STATl基础表达量均不高，H08910细胞中P-STAT1表达量，除control组与单用CC1007组比较P<0.05外，其余各组两两比较P〉0.05,差异无统计学意义（见图6)
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.31

【共引文献】

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本文编号：2587091