hnRNP E2对HPV16关键基因的调节及其在宫颈病变中的作用

发布时间：2020-04-07 05:34

【摘要】：目的:高危型HPV(HR-HPV)感染是宫颈病变发生的主要原因,HPV16为其主要型别。全球约60.6%的宫颈癌由HPV16感染引起。HPV16 E2、E6、L1、L2作为HPV致癌的关键基因,含有多种与RNA结合蛋白及蛋白复合体结合的位点。hnRNP E2作为一种特殊的RNA结合蛋白,在基因转录和转录后调控中具有独特作用,其特有的KH域为其与HPV16基因特异性结合提供了生物学基础。但是在宫颈病变中hnRNP E2的作用及其与HPV16关键基因的关系目前尚无定论。本研究采用人群研究和体外细胞实验两种方法,旨在探讨hnRNP E2与HPV16关键基因在宫颈病变中的作用及其相互关系,以期为宫颈癌的病因和发病机制研究提供理论依据,为宫颈癌的预防和治疗开拓新思路。方法:从课题组2014年6月至2014年9月于山西省介休市建立的社区宫颈病变队列中,选取正常宫颈(NC)妇女67名、低度宫颈上皮内瘤变(CINⅠ)患者69名、高度宫颈上皮内瘤变(CINⅡ/Ⅲ)患者68名,以及同期山西省肿瘤医院确诊的40名宫颈鳞状细胞癌(SCC)患者为研究对象。采用结构式问卷收集研究对象的一般人口学特征、个人生活习惯和生殖情况等资料的基础上,采集宫颈活检组织或手术标本以及宫颈脱落细胞,采用导流杂交法检测宫颈脱落细胞HPV16的感染情况,Western blot法检测宫颈组织中hnRNP E2及HPV16 E2、E6、L1、L2的蛋白表达量。同时选取宫颈癌细胞SiHa(HPV16阳性)为研究对象,采用过表达技术对SiHa细胞的hnRNP E2进行上调。设立hnRNP E2过表达组为实验组,以mock组(空白对照)和vector组(阴性对照)为对照,采用Real-time PCR法检测HPV16各关键基因mRNA的表达水平。利用SPSS21.0软件进行相关资料的χ~2检验、χ~2趋势检验、方差分析、重复测量方差分析。对不服从正态分布的资料采用Kruskal-Wallis H检验,两两比较采用LSD-t检验。两变量间的相关关系采用Spearman秩相关。以α=0.05为检验水准。结果:1.HPV16感染与宫颈病变的关系:HPV16感染率在NC组、CINⅠ组、CINⅡ/Ⅲ组和SCC组分别为10.4%、14.5%、41.2%和67.5%,随着病变程度的加重,HPV16感染率逐渐上升(χ~2_(趋势)=46.627,P0.001)。CINⅡ/Ⅲ组和SCC组HPV16的感染率均高于NC组。HPV16感染与宫颈病变呈正关联(CINⅠ:aOR=3.23(0.61-17.07);CINⅡ/Ⅲ:aOR=13.19(2.59-67.22);SCC:aOR=49.45(7.87-310.61)),是宫颈病变的危险因素。2.HPV16早期基因与宫颈病变的关系:HPV16 E2和E6的蛋白表达量在不同宫颈病变组的差异有统计学意义(HPV16 E2:H=19.870,P=0.001;HPV16 E6:H=16.201,P=0.001)。HPV16 E2蛋白表达量在CINⅡ/Ⅲ组低于NC组,在SCC组均低于NC组和CINⅠ组;而HPV16 E6蛋白表达量在SCC组高于CINⅠ组,其余组间差异均无统计学意义(P0.05)。SCC组HPV16 E2/E6的比值均低于NC组和CINⅠ组。3.HPV16晚期基因与宫颈病变的关系:HPV16 L1蛋白表达量(H=12.011,P=0.007)和L2蛋白表达量(H=11.859,P=0.008)在不同宫颈病变组的差异有统计学意义。SCC组HPV16 L1和L2蛋白表达量均低于CINⅠ组,其余组间差异均无统计学意义(P0.05)。4.hnRNP E2与宫颈病变的关系:hnRNP E2的蛋白表达量在不同宫颈病变组的差异有统计学意义(H=37.854,P0.001)。hnRNP E2蛋白表达水平在SCC组和CINⅡ/Ⅲ组均高于NC组,SCC组高于CINⅠ组,其余各组间的差异均无统计学意义(P0.05)。随着宫颈病变程度的加重,hnRNP E2蛋白低表达率逐渐升高(χ~2_(趋势)=20.389,P0.001)。5.hnRNP E2与HPV16早期和晚期基因之间的关系:hnRNP E2的蛋白表达量与HPV16 E2/E6比值(r=0.212,P0.001)、HPV16 L1(r=0.278,P=0.022)和HPV16 L2(r=0.446,P0.001)之间呈正相关关系。HPV16 E2的蛋白表达量与HPV16 E6(r=-0.295,P=0.025)呈负相关关系,与HPV16 E2/E6比值(r=0.572,P0.001)呈正相关关系,其他因子之间的相关性无统计学意义(P0.05)。6.hnRNP E2对宫颈癌细胞HPV16基因表达的影响:hnRNP E2过表达组HPV16 E2、E6、L1和L2的mRNA表达水平均低于mock组和vector组(P0.05)。结论:1.HPV16感染可增加发生宫颈病变的风险,因此及时对未感染者接种HPV疫苗,对于宫颈癌变的早期预防具有重要意义。HPV16 E2低表达、HPV16 E6高表达、L1和L2低表达、E2/E6低比值均可增加罹患CINⅡ/Ⅲ和SCC的风险,可以作为CINⅡ/Ⅲ和SCC辅助诊断的生物标志物,用于宫颈病变的早期筛查,对于癌变进展的风险预测具有潜在价值。2.hnRNP E2蛋白低表达可增加罹患CINⅡ/Ⅲ和SCC的风险,提示hnRNP E2的表达水平可以反映宫颈病变的进展,hnRNP E2表达降低可以作为宫颈病变加重的辅助诊断指标。3.hnRNP E2与E2/E6比值、HPV16 L1和HPV16 L2蛋白表达量之间呈正相关关系,提示在宫颈病变的发生发展过程中,hnRNP E2与HPV16 E2、E6、L1和L2的表达可能存在相互影响。4.上调hnRNP E2后,宫颈癌细胞HPV16 E2、E6、L1和L2的mRNA表达水平均降低,提示hnRNP E2可能作为转录抑制因子,抑制HPV16 E2、E6、L1和L2的转录。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.33

【参考文献】