IGF-1R抗体抑制Herceptin耐药卵巢癌细胞的机制研究
本文关键词：IGF-1R抗体抑制Herceptin耐药卵巢癌细胞的机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：研究背景:卵巢恶性肿瘤是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一,死亡率位列各类妇科肿瘤的首位。手术联合化疗能抑制肿瘤发展,但是复发率高。特异性抗体靶向治疗已经成为卵巢癌临床治疗的研究热点,先后有多种抗体进入临床研究,能够抑制疾病进展,具有良好的应用前景。但是,抗体耐药现象明显影响了疾病预后。因此,探讨卵巢癌抗体耐药的分子机制、寻找有效的干预策略具有重要意义。在前期工作中,我们利用抗HER2抗体曲妥珠长期处理敏感细胞系SKOV3,筛选获得一株抗体耐药的细胞株SKOV3-T。基因芯片分析结果显示,SKOV3-T细胞中HER2表达水平降低,而IGF-1R表达显著上调,提示耐药细胞发生了HER2表位逃逸,而IGF-1R信号通路的激活可能与抗体耐药相关。在此基础上,本研究将进一步确定IGF-1R在抗体耐药细胞系中的生物学功能,并尝试利用抗IGF-1R特异性抗体逆转耐药,探索在诱导耐药的过程中细胞发生适应性改变的内在机制。方法:利用流式细胞术、免疫印迹、细胞增殖、克隆形成、体内成瘤等方法,比较SKOV3和SKOV3-T细胞的生物学活性差异。利用真核转染技术在SKOV3中转入IGF-1R全长质粒提高IGF-1R表达水平,同时在SKOV3-T中转入IGF-1R-si RNA慢病毒下调IGF-1R的表达,借助克隆形成、细胞增殖、体内成瘤、细胞内信号等实验,验证IGF-1R在抗HER2抗体耐药中潜在作用。针对IGF-1R筛选获得了一种人源单克隆抗体LMAb1,借助细胞增殖、迁移、克隆形成、体内成瘤、信号转导等方法探讨抗IGF-1R抗体对HER2耐药的逆转效应;进一步,我们还通过流式细胞术鉴定并分选肿瘤干样细胞,利用细胞增殖、克隆形成、体内成瘤以及细胞内信号等指标,初步探索耐药发生过程中肿瘤干细胞适应性改变的分子机制。结果:HER2抗体耐药细胞SKOV3-T的增殖、迁移、克隆形成、体内成瘤能力均明显强于敏感细胞SKOV3;在敏感细胞中过表达IGF-1R使得细胞增殖、克隆形成、体内成瘤能力明显增强,细胞周期S期延长,而在耐药细胞中转入IGF-1R-si RNA慢病毒,降低IGF-1R表达水平,可以引起细胞增殖延缓、克隆形成和体内成瘤能力减弱,表明IGF-1R在耐药细胞系中具有重要的生物学作用,与耐药细胞的增殖和成瘤能力密切相关;进一步,我们制备了IGF-1R抗体LMAb1,实验表明,LMAb1能够特异性的抑制SKOV3-T细胞增殖、克隆形成、迁移和体内成瘤,提高荷瘤小鼠的生存率。细胞内信号结果显示,抗IGF-1R抗体能够抑制IGF-1R活化,阻断下游MAPK、AKT信号通路,部分逆转曲妥珠耐药;同时,流式细胞术鉴定结果显示,抗体耐药细胞系中干样细胞群比例明显升高,分选获得的干样细胞增殖、克隆形成、体内成瘤能力明显强于非干样细胞,提示在耐药诱导过程中普通肿瘤细胞发生了干细胞化转变。结论:IGF-1R分子在卵巢癌抗HER2抗体耐药中发挥重要作用,介导耐药细胞SKOV3-T的过度增殖、迁移、克隆形成、体内成瘤等生物学活性;利用抗IGF-1R抗体LMAb1特异性阻断IGF-1R信号,能够显著抑制耐药细胞的增殖和成瘤,部分逆转曲妥珠耐药现象;同时,在抗体耐药的过程中,卵巢癌干样细胞数量的增加可能与耐药细胞SKOV3-T的强致瘤性、耐药性、快速分化增殖等特性相关。
【关键词】：卵巢癌 IGF-1R 抗体耐药
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：
- 摘要4-6
- Abstract6-10
- 引言10-14
- 第一部分 卵巢癌耐药细胞系中IGF-1R的功能鉴定14-28
- 1.实验目的14
- 2.材料与方法14-17
- 2.1 材料14-15
- 2.2 方法15-17
- 3.结果17-26
- 3.1 SKOV3-T与SKOV3细胞的比较17-19
- 3.2 IGF-1R促进SKVO3细胞的增殖和成瘤19-23
- 3.3 敲低IGF-1R的表达可抑制SKOV3-T的增殖和成瘤23-26
- 4.讨论26-27
- 第一部分小结27-28
- 第二部分 抗IGF-1R抗体的功能鉴定及其作用机制的初步研究28-38
- 1.实验目的28
- 2.材料与方法28-31
- 2.1 材料28-29
- 2.2 方法29-31
- 3.结果31-36
- 3.1 LMAb1的设计、瞬时表达和纯化31-33
- 3.2 LMAb1抑制癌细胞体外增殖和克隆形成33-34
- 3.3 LMAb1抑制癌细胞迁移34-35
- 3.4 LMAb1具有良好的体内抑瘤效应35-36
- 3.5 LMAb1通过抑制IGF-1R信号通路发挥抑瘤效应36
- 4.讨论36-37
- 第二部分小结37-38
- 第三部分 耐药细胞发生适应性改变的初步机制研究38-46
- 1.实验目的38
- 2.材料和方法38-40
- 2.1 材料38-39
- 2.2 方法39-40
- 3.结果40-44
- 3.1 SKOV3-T干细胞相关转录因子检测40-41
- 3.2 耐药卵巢癌细胞SKOV3-T发生了干样细胞转变41-44
- 4. 讨论44-45
- 第三部分小结45-46
- 全文总结46-48
- 参考文献48-54
- 文献综述54-70
- 参考文献62-70
- 攻读学位期间发表的学术论文目录70-72
- 致谢72-74
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