B族链球菌阳性孕妇阴道微生态与早产发病机制的临床研究

发布时间：2020-04-23 23:33

【摘要】：研究背景B族链球菌(Group B Hemolytic streptococcus简称GBS)为革兰氏阳性球菌,是导致孕产妇及新生儿感染的重要致病菌[1]。临床观察发现,妊娠期GBS阳性孕妇大部分只是带菌,不致病,但有些病例尤其早产病例中有许多GBS 阳性者,且其早产儿发生新生儿肺炎及败血症的比例高且病情严重,已引起产科医生高度重视[2]。随着测序技术及生物信息学分析的发展,有关微生物与病理妊娠、不良妊娠结局的研究也日益增多,而早产相关的微生物种类、部位仍未明确或达成共识,还有待进一步研究[3]。是否GBS干扰阴道微环境使阴道菌群紊乱,或阴道炎性环境促使GBS由定植转为毒力活跃的病原菌,通过阴道及宫颈粘膜上行感染而诱发宫缩最终导致早产的发生呢?GBS引发早产可能的机制?IL-6和磷酸化STAT3在GBS阳性病例中的表达是否与早产机制的通路有关?早产病例的GBS菌株血清分型有何特点?也是产科临床研究的重要课题。基于以上背景,本研究通过以下四部分:1.GBS阳性孕妇阴道微生态与妊娠不良事件的相关性。2.分娩期GBS产妇羊水、胎盘及脐带血与母婴感染的关联性分析。3.GBS激活人胎盘组织与早产相关的信号通路。4.GBS阳性早产病例中IL-6及STAT3的表达及GBS菌株血清分型的特点。探讨B族链球菌阳性孕妇阴道微生态与早产的发病机制。目的探讨B族链球菌阳性孕妇阴道微生态与早产的发病机制。方法选择近两年在我院门诊建册至分娩的孕妇5862例,在门诊建册时,取阴道分泌物以五联阴道试剂盒检测检阴道微生态,以PCR层析法行GBS检测,至妊娠37周复查,并追踪围产结局;于分娩时采集羊水、胎盘母体而拭子及脐带血检测GBS,胎盘送病理检查;通过公共数据库GEO数据,GBS感染的人胎盘细胞,转录组芯片推测GBS引发早产的通路;采用ELISA法检测GBS阳性早产病例中IL-6的浓度,Western blot检测磷酸化STAT3的表达,PCR检测GBS血清分型。结果1.GBS阳性孕妇阴道微生态异常者较阴性者高,差异有显著性(P0.05)。妊娠早期及晚期阴道PH值及带菌种类和比例相近,差异无显著性(P0.05)。孕早期与37周各组GBS阳性率相近。GBS阳性并阴道微生态异常者孕妇晚期流产、早产及胎膜早破发生率较阴道微生态正常者高,差异有显著性(P0.05)。2.分娩时GBS阳性母亲羊水、胎盘及脐带血GBS阳性率分别为3.94%、3.94%及2.36%。GBS阴性者各项检测均阴性。GBS阳性母亲产后发热、产褥感染及产后出血率与阴性者相比差异无显著性,胎盘病理检查绒毛膜羊膜炎的发生率(69.29%)明显高于阴性者(18.94%),GBS 阳性母亲的新生儿感染率为2.36%,GBS阴性母亲,新生儿GBS均阴性。3.采用R软件limma来筛选差异表达基因。差异表达基因的挑选标准为Q-value(FDR)0.01,FC2或FC0.5,共发现89个差异表达基因。采用R软件clusterProfiler进行GO的富集分析,挑选标准为Q-value(FDR)0.01。TNF及IL-6为明显的差异表达基因。4.检测的IL-6及磷酸化STAT3在GBS阳性早产病例中的表达明显高于GBS阳性足月产者及GBS阴性者;分离得到的79株GBS共鉴定出9种血清型,孕足月分娩及孕足月胎膜早破者基因分型为Ia、Ⅰb、Ⅲ、Ⅳ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ和Ⅷ,早产病例中血清分型Ⅲ型(58.3%),其次为Ⅰ a型(16.6%)和V型(8.3%)及两例未分型(16.6%)。结论1.妊娠早期与晚期阴道菌群无明显变化,GBS阳性孕妇阴道微生态异常者较阴性者高,妊娠不良事件的病例中GBS 阳性并阴道微生态异常者高于GBS阴性并且微生态正常者;阴道分泌物GBS阳性而阴道微环境正常者,仅为定植,妊娠不良事件发生率低。2.妊娠期生殖道GBS 阳性母亲,羊水、胎盘及脐带血的阳性率高于阴性者,羊水、胎盘及脐带血阳性者新生儿有一定的带菌率和感染率,被感染的新生儿为早产儿,病情严重,应引起产科医师重视。3.在GBS激活的炎症与早产相关的途径中TNF、IL-6的表达发生了明显的变化。根据此转录组数据,这两种与分娩启动相关的因子的反应,支持了GBS可能引发早产的理论。4.GBS阳性早产病例阴道分泌物IL-6和磷酸化STAT3的表达明显高于胎膜早破及足月产者,也高于GBS阴性者。早产者GBS菌株以毒力强的Ⅲ型为主,另外有两株为不可分型,未知型菌株可能对孕妇和新生儿有较强致病能力,其与IL-6的分泌水平变化及STAT3的磷酸化及阴道微环境改变相互协同作用可能诱导早产的发生。
【图文】：

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．逡逑ｄ逡逑图１－３妊娠期异常阴道分泌物图谱逡逑Ｆｉｇ．邋１－３邋Ａｔｌａｓ邋ｏｆ邋ａｂｎｏｒｍａｌ邋ｖａｇｉｎａｌ邋ｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓ邋ｄｕｒｉｎｇ邋ｐｒｅｇｎａｎｃｙ逡逑注：妊娠期妇女阴道病原菌ＢＶ阳性，见线索细胞（１０Ｘ４０倍）逡逑１逡逑图１－４妊娠期异常阴道分泌物图谱逡逑Ｆｉｇ．邋１－４邋Ａｔｌａｓ邋ｏｆ邋ａｂｎｏｒｍａｌ邋ｖａｇｉｎａｌ邋ｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓ邋ｄｕｒｉｎｇ邋ｐｒｅｇｎａｎｃｙ逡逑注：外阴阴道假丝酵母菌感染。见念珠菌丝及芽孢（１０Ｘ１０倍）逡逑１６逡逑

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注：妊娠期妇女阴道病原菌ＢＶ阳性，见线索细胞（１０Ｘ４０倍）逡逑１逡逑图１－４妊娠期异常阴道分泌物图谱逡逑Ｆｉｇ．邋１－４邋Ａｔｌａｓ邋ｏｆ邋ａｂｎｏｒｍａｌ邋ｖａｇｉｎａｌ邋ｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓ邋ｄｕｒｉｎｇ邋ｐｒｅｇｎａｎｃｙ逡逑注：外阴阴道假丝酵母菌感染。见念珠菌丝及芽孢（１０Ｘ１０倍）逡逑１６逡逑
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R714.21

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