DENND1A与子宫内膜癌临床病理特征及生物学行为的研究

发布时间：2020-05-09 14:32

【摘要】：目的:利用天津医科大学总医院子宫内膜组织标本库,采用免疫组化的方法探讨子宫内膜癌组织中DENND1A的表达及其与临床病理特征及预后的关系;采用慢病毒转染试验在体外探讨DENND1A对子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,并利用Western blot方法检测DENND1A对PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达及活化情况,为子宫内膜癌的发生发展提供新的思路。方法:1.收集228例子宫内膜癌患者及同期匹配的148例正常对照和46例不典型性增生子宫内膜患者相关病例资料;免疫组化方法检测DENND1A在这三种组织中的表达情况,分析子宫内膜癌组织中DENND1A表达与子宫内膜癌患者临床病理特征的关系,并探讨DENND1A与子宫内膜癌患者生存及预后的关系。2.Western blot检测DENND1A在子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa、HEC-lA、HEC-lB、KLE中的表达。选择子宫内膜癌HEC-1B及HEC-1A细胞,采用慢病毒转染的方法分别上调和下调DENND1A表达,qRT-PCR和Western blot方法检测上调和下调效果。采用克隆形成试验检测上调和下调DENND1A后子宫内膜癌细胞增殖的情况;采用Transwell小室检测上调和下调DENND1A后子宫内膜癌细胞迁移、侵袭的情况。采用Western blot方法检测上调DENND1A后子宫内膜癌细胞信号通路蛋白t-Akt、p-Akt和CyclinD1的表达情况。结果:1.子宫内膜癌组织DENND1A表达水平高于正常对照和不典型性增生子宫内膜组织,但无统计学差异(P0.05)。子宫内膜癌组织中FIGO I-II期患者DENND1A阳性表达水平明显高于III-IV期患者,差异具有统计学意义(P0.05)。在I型子宫内膜癌组织中:FIGO I-II期患者DENND1A阳性表达水平明显高于III-IV期患者,无淋巴结转移患者DENND1A阳性表达的水平明显高于有淋巴结转移的患者,差异均具有统计学意义(P0.05);DENND1A阳性表达组预后明显高于阴性表达组患者,差异具有统计学意义(P0.05)。2.六个子宫内膜癌细胞系中HEC-1A细胞DENND1A表达水平最高,HEC-1B细胞DENND1A表达水平最低。慢病毒转染后HEC-1B细胞中DENND1A表达增加,HEC-1A细胞中DENND1A表达下降。上调DENND1A表达后,与阴性对照组相比,子宫内膜癌HEC-1B细胞克隆形成数量减少,体积较小,差异有统计学意义(P0.05);与阴性对照组相比,Transwell小室试验显示,HEC-1B细胞穿膜数明显减少(迁移:65.9±3.7162 vs.33.3±5.9080;侵袭:25.3±3.4503 vs.9.0±2.0000),差异具有统计学意义(P0.05)。下调DENND1A表达后,与阴性对照组相比,HEC-1A细胞克隆形成数量增加,体积较大,差异有统计学意义(P0.05);与阴性对照组相比,Transwell小室试验显示,HEC-1A细胞穿膜数增加(迁移:13.6±3.2094 vs.32.4±3.9115;侵袭:6.3±1.0328 vs.17.5±5.7183),差异有统计学意义(P0.05)。DENND1A上调后,与阴性对照组相比,DENND1A的表达量增加,同时p-Akt、CyclinD1的表达水平减少,差异有统计学意义(P0.05),t-Akt表达水平无明显变化(P0.05)。结论:1.DENND1A可能与子宫内膜癌发生发展相关,DENND1A阳性表达与子宫内膜癌患者早期、无淋巴结转移有关,且预后好,在I型子宫内膜癌中尤为明显,提示DENND1A可能为I型子宫内膜癌发生的早期事件,DENND1A有可能成为I型子宫内膜癌预后的分子标志物。2.上调HEC-1B细胞中的DENND1A后,细胞克隆形成能力降低,Transwell小室细胞穿膜数减少,下调HEC-1A细胞中的DENND1A后,细胞克隆形成能力增加,Transwell小室细胞穿膜数增加,表明DENND1A可抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭。DENND1A上调抑制子宫内膜癌细胞Akt活化,同时抑制CyclinD1表达,表明DENND1A可能是通过PI3K/Akt信号通路抑制子宫内膜癌细胞进展。
【图文】：

子宫内膜癌,不典型增生,患者,淋巴结转移

.1 正常、不典型增生及子宫内膜癌组织中 DENND1A 表达情况（PV 法，×4002 子宫内膜癌组织 DENND1A 表达与患者临床病理特征的关系为研究子宫内膜癌组织中 DENND1A 表达的临床意义，进一步分析了子宫癌组织中 DENND1A 表达与子宫内膜癌患者临床病理特征间关系，研究结示如下：子宫内膜癌组织 DENND1A 阳性表达与临床分期进展相关(P<0.05)：临床病理分期 I-II 期患者 DENND1A 阳性表达的比例明显高于 III-IV 期患者，差异具有统计学意义（χ2=8.939，P=0.003），结果见表 1.3。子宫内膜癌组织 DENND1A 阳性表达与患者发病年龄、糖尿病、高血压、PCOS、组织学分型、肌层浸润及淋巴结转移无关（P＞0.05），结果见表 1.3子宫内膜样腺癌组织 DENND1A 阳性表达与临床分期进展和淋巴结转移相关(P<0.05)：临床病理分期 I-II 期患者 DENND1A 阳性表达的比例明显高于III-IV 期患者，差异具有统计学意义（χ2=11.987，P=0.001）；无淋巴结转移的患者 DENND1A 阳性表达的比例明显高于有淋巴结转移的患者，差异具

子宫内膜癌,表达水平,患者,预后

死于其他原因 6 例（5.55%），存活 79 例（73.15%）；90 例 DENND1A 阳性表达组的患者中，死于该疾病 10 例（11.11%），死于其他原因 8 例（8.89%），存活 72 例（80.00%）。在这 198 例随访子宫内膜癌患者中，有 167 例为子宫内膜样腺癌，其中 37 例死亡（26 例死于该疾病，，11 例死于其他原因）。91例 DENND1A 阴性表达组中，死于该疾病 20 例（21.98%），死于其他原因 5例（5.49%），存活 66 例（72.53%）；76 例 DENND1A 阳性表达组中，死于该疾病 6 例（7.89%），死于其他原因 6 例（7.89%），存活 64 例（84.21%）。2) 应用 Kaplan-Meier 法对 DENND1A 阴性表达及阳性表达组的预后情况进行分析，差异性经 Log-rank 检验，结果表明：198 例随访子宫内膜癌患者中，DENND1A 阳性表达组的预后高于 DENND1A 阴性表达组，但未发现统计学差异(χ2=2.520，P=0.112)，详见图 1.2A。在 167 例随访子宫内膜样腺癌患者中，DENND1A 阳性表达组的预后明显高于 DENND1A 阴性表达组，即DENND1A 阳性表达组的预后明显好于 DENND1A 阴性表达组，且差异有统计学意义(χ2=5.145，P=0.023)，详见图 1.2B。A B
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.33

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