达英-35联合二甲双胍改善PCOS大鼠卵泡发育的能量代谢调控的初步研究

发布时间：2020-05-20 07:15

【摘要】：目的:多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是青春期及育龄期女性中常见的一种妇科内分泌代谢异常疾病,严重影响患者的生育能力。体外受精-胚胎移植术显示达英-35联合二甲双胍处理PCOS后促排卵可获得较好的卵泡发育和排卵,从而提高PCOS患者的辅助生殖临床结局。但关于两者联合治疗调控PCOS卵泡发育的机制仍未明确。本研究初步探讨联合治疗调控卵泡发育的机制,从而阐述达英-35联合二甲双胍改善PCOS患者排卵障碍的分子机制,以便更好地为临床上应用提供理论依据。方法:5周龄SD雌性大鼠40只适应性饲养一周,随机分为对照组10只和造模组30只。造模组大鼠用来曲唑灌服伴高脂饲料喂养30天;对照组大鼠予相同剂量的1%羧甲基纤维素(CMC)灌服伴普通饲料喂养。模型构建成功后分组为PCOS组(模型组)和达英-35联合二甲双胍治疗组(联合治疗组)。第一部分:阴道涂片监测各组SD大鼠造模及治疗期间动情周期的变化;放射免疫法分别测定SD大鼠血清中空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)、促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、(luteinizing hormone,LH)、睾酮(Testosterone,T)等生殖激素含量;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察卵巢组织结构的变化;免疫组化观察卵巢颗粒细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达情况;TUNEL法观察卵巢颗粒细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)定量分析PCNA及凋亡相关基因BAX、BCL-2、CASPASE-3表达的变化。第二部分:基于MRM方法的靶向代谢组学测定卵巢糖能量代谢产物含量的变化;qRT-PCR定量分析糖酵解相关限速酶GLUT1、单羧酸转运蛋白2/4(monocarboxylate transporter,MCT2/4)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、己糖激酶(hexokinase,HK)、磷酸果糖激酶(phosphate fructose kinase,PFK)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)表达的变化。结果:(1)经动情周期监测、激素检查、形态学等指标观察发现PCOS大鼠动情周期紊乱、LH较正常组升高,T升高显著,胰岛素抵抗(IR)明显、卵巢呈多囊样改变、颗粒细胞层数减少甚至消失,偶见少量黄体,经联合治疗后,动情周期恢复、生殖激素与对照组无差别,卵巢内可见各级卵泡,颗粒细胞层数多,有大量黄体产生,提示联合治疗后卵巢可恢复正常排卵。(2)通过免疫组化和qRT-PCR检测卵巢颗粒细胞增殖与凋亡的蛋白和基因发现PCOS大鼠中卵巢颗粒细胞增殖明显受到抑制,颗粒细胞凋亡显著,经过联合治疗后显著提高卵巢颗粒细胞增殖,抑制卵巢细胞促凋亡因子(BAX、CASPASE-3)的表达,显著提高抑凋亡基因(BCL-2)的表达,提示联合治疗后可促进卵泡的发育。(3)通过代谢组学和qRT-PCR检测糖酵解产物及限速酶发现PCOS大鼠卵巢能量代谢途径发生紊乱,其中糖酵解产物丙酮酸升高,乳酸含量显著下降,且糖酵解相关限速酶发生显著变化,其中GLUT1表达显著升高、HK表达显著降低,同时MCT4和LDH、PFK、PKM等表达明显下调,经过联合治疗后,乳酸含量显著升高,糖酵解相关限速酶上调明显,提示卵泡发生过程中的能量供应主要通过糖酵解途径。结论:达英-35联合二甲双胍治疗PCOS大鼠在卵巢水平上可显著改善其内分泌功能,促进卵泡颗粒细胞增殖并抑制卵巢细胞凋亡,恢复卵泡正常排卵,其机制是通过提高糖酵解相关限速酶的表达,显著提高卵巢乳酸水平,维持卵泡发育所需要的能量。
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R711.75

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