miR-542-5p在浆液性卵巢癌中的表达及其作用机制的研究

发布时间：2017-03-25 16:07

  本文关键词：miR-542-5p在浆液性卵巢癌中的表达及其作用机制的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：卵巢癌(Ovarian cancer)是最常见的女性生殖系统的恶性肿瘤之一,其死亡率居女性生殖道恶性肿瘤的首位。因卵巢癌发病机制尚不明确,早期无明显临床症状,70%以上的患者在肿瘤进展为中晚期时才被发现。由于目前尚缺乏早期筛查和诊断措施,其5年存活率仅30%[1-3]。因此,我们迫切的需要了解卵巢癌的发生机制,寻找一种能够早期诊断或有效治疗卵巢癌的方法。Micro RNA(mi RNA)是新发现的长度为19-25个核苷酸的内源性小非编码RNA,其通过直接降解靶m RNA或抑制蛋白质翻译来负性调控其对应靶基因的表达[4]。mi RNA参与了细胞的增殖,分化,生长代谢以及凋亡等生物进程,与肿瘤的产生和进展联系密切[5]。越来越多的证据表明,大量mi RNA在人类卵巢癌组织中异常表达,其参与了卵巢癌的发生和发展过程,并发挥重要作用[6]。这些表达异常的mi RNA有可能成为卵巢癌早期诊断和评价预后的疾病标志物,并且有可能成为卵巢癌的治疗靶点。因此,对于mi RNA和卵巢癌相关性的研究具有十分重要的意义和价值。近年来有文献报道,浆液性卵巢癌并非起源于正常的卵巢组织,而是来源于输卵管上皮[7-9]。本研究小组前期通过mi RNA芯片技术筛选浆液性卵巢癌和正常输卵管伞端上皮组织中差异性表达的mi RNA,发现mi R-542-5p在浆液性卵巢癌组织中表达明显下调,差异倍数达25倍,表明它可能参与了浆液性卵巢癌的发生发展[10]。研究表明,mi R-542-5p在多种肿瘤组织中表达异常,参与了肿瘤的发生发展,但目前国内外均未见对其与卵巢肿瘤相关性的报道。为了进一步明确mi R-542-5p在卵巢癌中的表达,并初步了解卵巢癌发生和进展的分子机制,本研究将对其在卵巢癌组织中的表达进行大样本的PCR验证、对卵巢癌细胞系的相关生物学行为的影响等问题进行初步探讨,初步预测并验证其作用的下游靶基因。目的:1.检测mi R-542-5p在浆液性卵巢癌中的表达情况,并分析mi R-542-5p的表达与浆液性卵巢癌临床病理特征之间的关系,探讨其意义。2.探讨mi R-542-5p对卵巢癌细胞系SKOV3的增殖、迁移、侵袭、凋亡等恶性生物学行为的影响。3.预测并验证其作用的靶基因,进一步明确mi R-542-5p在浆液性卵巢癌发生发展中的作用机制。方法:1.采用实时荧光定量PCR技术分析100例浆液性卵巢癌组织及50例正常输卵管伞端组织中mi R-542-5p的表达,将检测结果进行统计学分析。2.将mi R-542-5p mimics、mimics NC(mimics阴性对照)转染卵巢癌细胞SKOV3。采用MTT实验、划痕实验、Transwell实验和流式细胞术检测过表达mi R-542-5p对SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。3.通过生物信息学软件预测出mi R-542-5p可能作用的靶基因,并采用RT-PCR、Western-blot技术和双荧光素酶报告系统分别进行验证。结果:1.浆液性卵巢癌组织中mi R-542-5p的表达显著低于正常输卵管伞端组织(P0.05)。mi R-542-5p的表达与浆液性卵巢癌各临床病理特征之间差异均无统计学意义(P0.05)。2.过表达mi R-542-5p后,SKOV3细胞的增殖能力较阴性对照和正常SKOV3细胞明显降低(P0.05);transwell实验和划痕实验显示,过表达mi R-542-5p后,细胞的迁移和侵袭能力较阴性对照组明显下降(P0.05);流式细胞术结果显示,过表达mi R-542-5p后,SKOV3细胞的凋亡率较阴性对照组升高,而对细胞周期无影响。3.通过多种软件预测,选取了mi R-542-5p可能作用的靶基因为Ywhab。RT-PCR分析结果显示,过表达mi R-542-5p后,SKOV3细胞中Ywhab的含量较阴性对照和正常SKOV3细胞明显降低;Western-blot技术分析结果提示,转染了mi R-542-5p类似物的细胞中,Ywhab蛋白的表达较阴性对照降低;双荧光素酶报告系统结果显示:mi R-542-5p能够抑制含有其结合位点的野生型质粒的荧光素酶活性,而对其对照组和含有突变位点的质粒无明显影响。结论:1.mi R-542-5p可能作为抑癌基因参与了浆液性卵巢癌的发生,对于卵巢癌的早期诊断及治疗具有潜在意义。2.过表达mi R-542-5p可以抑制卵巢癌细胞SKOV3的体外增殖、迁移和侵袭能力,诱导凋亡。提示mi R-542-5p在卵巢癌恶性生物学进程中可能发挥重要作用。3.Ywhab有可能是mi R-542-5p作用的靶基因之一,mi R-542-5p通过与Ywhab的3’-UTR区结合对其进行转录后调控。
【关键词】：miRNA mi R-542-5p 浆液性卵巢癌 Ywhab
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 缩略语表4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-13
• 文献回顾13-22
• 第一部分 mi R5425p在浆液性卵巢癌中的表达及意义22-31
• 1 材料22-23
• 2 方法23-26
• 3 结果26-28
• 4 讨论28-31
• 第二部分 mi R5425p对卵巢癌细胞SKOV3恶性生物学行为的影响的研究31-42
• 1 材料31-32
• 2 方法32-35
• 3 结果35-40
• 4 讨论40-42
• 第三部分 mi R5425p靶基因的预测和验证42-54
• 1 材料42-45
• 2 方法45-50
• 3 结果50-52
• 4 讨论52-54
• 小结54-55
• 参考文献55-63
• 个人简历和研究成果63-64
• 致谢64

【参考文献】

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1 娄艳辉;杨兴升;王福玲;钱金花;黄煜;;miR-21在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义[J];南方医科大学学报;2010年03期

  本文关键词：miR-542-5p在浆液性卵巢癌中的表达及其作用机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：267431