子宫内膜样腺癌中LAG-3、FoxP3与错配修复蛋白表达相关性分析

发布时间：2020-06-06 14:57

【摘要】：目的:免疫检查点是免疫疗法的热点之一。研究表明,错配修复(mismatch repair,MMR)蛋白缺失的患者是免疫检查点抑制剂治疗的优势人群。淋巴细胞活化基因3(lymphocyte activation gene-3,LAG-3)是表达在T细胞表面的免疫检查点分子,LAG-3在结直肠癌中的表达增高与MMR缺失相关,但在子宫内膜样腺癌中未见报道。叉头状转录因子3(Forkhead box P3,FoxP3)是调节性T细胞的标志性分子。LAG-3~+FoxP3~+调节性T细胞在多种实体瘤中表达增加,并与肿瘤的不良预后相关,但在子宫内膜癌中少见报道。本研究观察子宫内膜样腺癌组织中LAG-3、FoxP3与MMR蛋白表达水平及与临床病理特征的相关性;探讨LAG-3与MMR蛋白表达的相关性,以说明MMR缺失子宫内膜癌患者是否为抗LAG-3免疫治疗的优势人群。方法:选择2016-2017年间有完整临床病理资料的子宫内膜样腺癌203例,用免疫组化的方法检测MMR蛋白表达情况;并在其中选取36例MMR蛋白表达缺失(deficient in MMR,dMMR)的病例与36例MMR蛋白完整表达(proficient in MMR,pMMR)病例按照1:1配比组成配对资料72例,选取的病例在年龄,肿瘤发生的部位,大小,组织学分级之间差别无统计学意义;用免疫组化的方法检测FoxP3和LAG-3的表达情况;分析两者表达与MMR表达、肿瘤浸润淋巴细胞数目、肿瘤大小、弥漫性生长方式、组织学分级、淋巴结转移之间的相关性;分析FoxP3和LAG-3二者表达的相关性;免疫荧光的方法检测FoxP3和LAG3的亚细胞定位;并利用TCGA数据库分析FoxP3、LAG3及MMR蛋白在内膜癌中的表达。结果:(1)本研究中203例子宫内膜样腺癌中dMMR病例共56例(27.6%)。dMMR内膜癌发生部位多位于子宫角,呈局限性生长方式(P0.05);pMMR发生部位多位于子宫体布满宫腔内,呈弥漫性生长(P0.05)。dMMR患者发病年龄较pMMR患者年轻,但是差异没有统计学意义。MMR表达情况与肿瘤浸润深度,组织学分级、淋巴结转移之间没有明显相关性(P0.05)。(2)选取的dMMR病例与pMMR病例相比,LAG-3在肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)中以及在间质浸润淋巴细胞中表达增高,FoxP3在间质浸润淋巴细胞中高表达(P0.01)。(3)LAG-3表达增高与肿瘤弥漫性的生长方式相关,肿瘤常布满整个宫腔(P0.01)。FoxP3与LAG-3表达情况与肿瘤大小有关(P0.01),与发病年龄、肿瘤部位、组织分化、浸润深度、淋巴结转移、ER、PR和P53无明显相关性。(4)LAG-3表达在淋巴细胞的膜表面,FoxP3表达在淋巴细胞的细胞核,二者表达有相关性(P0.05)。免疫荧光证实两者存在同一细胞上的共表达。(5)TCGA数据库中分析MSI的病例MSS的病例相比LAG-3mRNA表达水平增高,LAG-3与FoxP3的mRNA表达正相关,LAG3 mRNA表达水平随肿瘤分期增高而增加,与患者预后没有明显相关性。结论:LAG-3蛋白在dMMR子宫内膜样腺癌组织内高表达,提示对dMMR子宫内膜样腺癌患者采用抗LAG-3治疗获益的可能性更大。LAG-3与FoxP3表达水平正相关,且二者在同一细胞共表达,推测LAG-3促进免疫逃逸的机制可能与FoxP3~+调节性T细胞有关。因此,dMMR子宫样腺癌患者可能是抗LAG-3治疗的优势人群;抗LAG-3免疫治疗的作用机制可能与FoxP3~+调节性T细胞有关。
【图文】：

肿瘤浸润淋巴细胞,子宫内膜样,腺癌,HE染色

在柠檬酸钠缓冲液的高压锅中加热进行抗原修复。山羊血清封闭与 FoxP3 混合比例为 1：1 的一抗、4°C 孵育过夜。次日，荧光二bbit IgG-FITC（absin 生物技术有限公司：abs20004）、Goat An antibody（absin 生物技术有限公司：abs20007）孵育切片。37°CAPI（赛默飞公司：D1306）复染细胞核。用尼康-50i 荧光显微镜。果判读L 数目：复阅 HE 切片，观察肿瘤内肿瘤浸润淋巴细胞（tumor incyte，TIL）数目。TIL 仅代表肿瘤细胞巢内或肿瘤腺体内的淋巴细质内浸润淋巴细胞（图 1）。在淋巴细胞浸润最多的区域计数至少野（200 倍），总数大于 42 个淋巴细胞/10 HPF 被定义为肿瘤具有高-20]。

子宫内膜癌,免疫组化染色,阴性,肿瘤浸润

中国医科大学硕士学位论文巴细胞 LAG-3（+），31 例（86.1%）肿瘤间质浸润淋巴细胞 FoxP3（+）（图 2此外，，在肿瘤浸润前沿淋巴细胞密度一般均高于肿瘤的中心区域以及间质中淋细胞密度，肿瘤浸润的前沿区域 LAG-3 及 FoxP3 阳性淋巴细胞的表达水平高肿瘤区域和间质区域的浸润淋巴细胞。LAG-3 与 FoxP3 在表达水平增高的病例肿瘤最大径较大（P<0.01）；LAG-FoxP3 阳性淋巴细胞百分率与 TIL 数目正相关（P<0.01）；LAG-3 表达增高与瘤弥漫性的生长方式相关，肿瘤常布满整个宫腔（P<0.01），LAG-3 和 FoxP3达与年龄，肿瘤位置，组织分化，肿瘤浸润深度，淋巴结转移， ER， PR 和之间无显著相关性（表 3）。dMMR 与 pMMR 病例相比，LAG-3 在 TIL 以及间浸润淋巴细胞中表达增高（P<0.01），FoxP3 在间质浸润淋巴细胞中表达增（P<0.01）（表 2）。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.33

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