HA、CD44信号途径中Nanog基因和STAT3对卵巢癌细胞生长的影响

发布时间：2020-06-12 20:44

【摘要】：目的:通过检测Nanog和STAT3在上皮性卵巢癌中的表达情况及相互作用,探讨在HA、CD44信号途径中,Nanog基因和STAT3的协同作用以及它们对卵巢恶性肿瘤细胞生命的影响,为卵巢恶性肿瘤的分子生物学靶点治疗方案提供数据论点。方法:(1)结合逆转录-聚合酶链反应法检测Nanog基因对SKOV3细胞中STAT3信使RNA表达的变化。向SKOV-3细胞孵育液中加入透明质酸孵育1440分钟;滴入抗CD44抗体孵育60分钟,再加入透明质酸继续孵育1440分钟;孵育液中加入Nanog小干扰RNA转染试剂复合物孵育2880分钟,再滴入透明质酸继续孵育1440分钟;加入Nanog互补DNA转染试剂复合物孵育2880分钟,再滴入透明质酸继续孵育1440分钟。应用逆转录-聚合酶链反应法检测STAT-3信使RNA占有量。(2)将SKOV-3细胞孵育液分为实验组和对照组。结合卵白质印迹法检测SKOV3细胞中STAT3卵白的表达情况。SKOV-3细胞培养液中添加透明质酸培养1440分钟;滴入抗CD44抗体温箱孵育60分钟,滴入透明质酸继续孵育1440分钟。验证STAT-3卵白结合蛋白质印迹法后的孵育能力。(3)CCK-8检测Nanog转染后SKOV-3细胞的生命存活量。SKOV-3细胞孵育液中添加透明质酸孵育1440分钟;滴入抗CD44抗体孵育60分钟,再滴入透明质酸继续孵育1440分钟;添加Nanog小干扰RNA转染试剂复合物孵育2880分钟后,再滴入透明质酸继续孵育1440分钟。上述各组细胞孵育液中分别加入CCK-8试剂继续孵育60分钟后,用酶标仪测定波长450nm的吸光值(OD值)。结果:细胞核STAT-3蛋白在对照组、添加透明质酸组、添加anti-CD44抗体后再添加透明质酸组中的相对表达水平分别为:1.0945±0.0187、1.3233±0.0277、0.8519±0.0198,各组间差异有统计学意义(P0.05)。细胞中STAT-3信使RNA在对照组、添加透明质酸组、添加anti-CD44抗体后再添加透明质酸组、转染Nanog小干扰RNA组、转染Nanog互补DNA组中的相对表达水平分别为:2.0841±0.0391、3.6100±0.3208、1.2500±0.0800、1.8533±0.0833、6.9367±0.0961,各组间差异有统计学意义(P0.05)。SKOV-3细胞在对照组、添加透明质酸组、添加anti-CD44抗体后再添加透明质酸组、转染Nanog小干扰RNA再添加透明质酸组、转染Nanog互补DNA再添加透明质酸组中的吸光值分别为:0.584、0.847、0.380、0.464、1.145,各组间差异有统计学意义(P0.05)。结论:在HA、CD44信号途径中,Nanog基因在卵巢癌SKOV3细胞系中高表达,其与STAT3具有协同作用,共同加强卵巢癌细胞的增殖能力,促进卵巢癌细胞的生长。
【图文】：

SKOV-3细胞（×10）

结 果育 2880 分钟后可见荧光显影证明转染V3 细胞。-3 蛋白在 SKOV-3 细胞核中组、添加 HA 组、添加 anti-CD1.0945±0.0187、 1.3233±0.0277T-3 蛋白高于对照组，，约为对照加抗 CD44 抗体后添加 HA 细胞-3 蛋白约为添加抗 CD44 抗体后添加HA组细胞核STAT-3蛋白明 CD44 抗体组的 1.6 倍，差异有1 2 3
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.31

【参考文献】

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本文编号：2710090