孕哺期暴露邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯影响仔鼠甲状腺功能的实验研究

发布时间：2020-06-21 06:44

【摘要】：目的:邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(Di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)是一种环境内分泌干扰物,它可以增加产品的可塑性和弹性,常以增塑剂的形式广泛用于塑料制品、食品包装、医疗及个人理护用品。人群在日常生活中主要通过消化道、吸入和皮肤而非职业性接触DEHP。虽然DEHP只显示较低毒性,但对于其内分泌干扰作用最近得到了广泛关注。甲状腺是内分泌系统中的一个重要器官,它通过产生甲状腺激素来调节机体相关功能。有些许研究表明暴露DEHP会导致甲状腺功能异常,但其机制尚不清晰。我们已知妊娠期母体甲状腺功能减退会对胎儿产生不良影响,而也有相关文献讨论母体孕哺期暴露DEHP会对儿童甲状腺产生影响。为了探讨妊娠期和哺乳期母体DEHP暴露与子代甲状腺功能之间的关系,也为了判断DEHP如何损伤甲状腺激素功能,本研究建立了母鼠孕哺期暴露DEHP的模型,检测了甲状腺激素合成的相关蛋白和脱碘化酶家族的蛋白和基因水平。实验方法:将怀孕的雌性Wistar大鼠随机分为四组:以DEHP 0mg/kg/day、30mg/kg/day、300mg/kg/day和750mg/kg/day的暴露剂量,将相应浓度的DEHP溶于玉米油溶液后,从妊娠第一天至仔鼠出生后第二十一天进行灌胃染毒。在仔鼠PND7、PND 14、PND 21和PND 28时间点时,取仔鼠血清检测甲状腺激素水平,在仔鼠PND 7时间点时,取仔鼠甲状腺进行透射电镜扫描,并在仔鼠PND 14和PND 21时间点时,通过Real time PCR和Western blot检测甲状腺激素合成的相关蛋白和脱碘化酶家族的蛋白和基因水平。结果:1、通过检测血清THs水平,与对照组相比,在PND 7和PND 14,TT_4显著下降,TSH出现显著升高(P0.05);PND 21时DEHP 300mg/kg/d剂量组和750mg/kg/d剂量组与对照组相比,在TT_4和TSH水平上出现相同趋势(P0.05),而DEHP30mg/kg/d剂量组只有升高而差异没有统计学意义(P0.05)。在PND 28时,四组之间TSH水平无明显改变,TT_4出现下降趋势,差异无统计学意义(P0.05)。血清TT_3水平除了PND 14时间点的DEHP 30mg/kg/d剂量组和DEHP 750mg/kg/d剂量组与对照组相比有明显下降以外(P0.05),PND 7、PND 21、PND 28的所有四个剂量组以及PND 14的DEHP 300mg/kg/d剂量组均无明显改变。2、通过电镜观察超微结构,发现随着DEHP暴露剂量的增高,甲状腺滤泡上皮细胞破坏严重,其游离缘处微绒毛几乎全部断裂;细胞核形态极其不规则,出现破裂,核周围出现核间隙;细胞质内粗面内质网出现显著扩张,呈现池状,丧失原有基本形态;线粒体内嵴模糊,断裂,形态呈明显肿胀,变成空泡状,大量消失;胞质出现大量溶酶体,其他细胞器基本消失,视野中基本为空泡结构。3、Real time PCR结果显示,DEHP750mg/kg/d剂量组与对照组相比,TTF-1、NIS、PAX-8在PND 14和PND 21均明显上调(P0.05)。TTF-1和NIS的DEHP 300mg/kg/d剂量组在PND 14和PND 21也出现了明显上调(P0.05)。DEHP 30mg/kg/d剂量组NIS、PAX-8、TTF-1基因在PND 14和PND 21只有上调趋势,差异无显著性,不具有统计学差异(P0.05)。Western结果显示,NIS在PND 14时DEHP 750mg/kg/d和300mg/kg/d剂量组与对照组相比明显上调(P0.05),DEHP 30mg/kg/d剂量组只有上调趋势而差异无统计学意义(P0.05);在PND 21,三个DEHP暴露剂量组均有明显上调趋势(P0.05)。PAX-8和TTF-1在PND 14时DEHP 750mg/kg/d剂量组与对照组相比明显上调(P0.05);DEHP 300mg/kg/d和30mg/kg/d剂量组只有上调趋势而差异无统计学意义(P0.05);在PND 21,DEHP 750mg/kg/d和300mg/kg/d剂量组显著上调(P0.05),DEHP 30mg/kg/d剂量组只有上调趋势而差异无统计学意义(P0.05)。4、在PND14和PND 21,Real time PCR和Western bolt结果显示,TPO的基因和蛋白表达水平在DEHP 750mg/kg/d剂量组中与对照组相比显著上调(P0.05)。DEHP30mg/kg/d和300mg/kg/d剂量组在PND 14和PND 21也表现出了上升趋势,但差异并无统计学意义(P0.05)。5、Real time PCR结果显示,Dio1在PND 14的DEHP30mg/kg/d剂量组与对照组相比出现升高趋势而差异无统计学意义(P0.05),在PND 14和PND 21的其他各DEHP剂量组均有显著上升趋势(P0.05)。Dio2和Dio3在各DEHP剂量组的PND 14和PND 21均出现了明显的变化(P0.05),区别在于Dio2表现为上调趋势而Dio3表现为下调趋势。结论:1、孕哺期暴露DEHP损害仔鼠甲状腺滤泡上皮细胞超微结构,可造成仔鼠甲状腺功能紊乱。2、孕哺期暴露DEHP可通过上调仔鼠甲状腺功能蛋白TTF-1、PAX-8、NIS、TPO进一步影响血清THs水平。3、孕哺期暴露DEHP可通过上调仔鼠Dio1、Dio2和下调Dio3造成仔鼠甲状腺功能紊乱。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R715.3
【图文】：

仔鼠,血清,时间点

10图 3.1，DEHP 对各时间点各组仔鼠血清 TT4、TT3、TSH 水平的影响注：图中*，与 DEHP 0 mg/kg/day 剂量组相比，P < 0.05。PND 7，n=12，PND 14、PND 21、PND28，n=16

仔鼠,甲状腺,时间点,电镜

形态出现明显肿胀，数量开始减少甚至出现巨大线粒体；胞质中溶酶体数量开始增多（图3.2C）。在 DEHP 750mg/kg/d 剂量组中，甲状腺滤泡上皮细胞破坏严重，其游离缘处微绒毛几乎全部断裂；细胞核形态极其不规则，出现破裂，核周围出现核间隙；细胞质内粗面内质网出现显著扩张，呈现池状，丧失原有基本形态；线粒体内嵴模糊，断裂，形态呈明显肿胀，变成空泡状，大量消失；胞质出现大量溶酶体，其他细胞器基本消失，视野中基本为空泡结构（图 3.2D）。

【参考文献】