细胞源性微囊泡及相关因子与子痫前期发病的临床研究

发布时间：2020-06-28 06:32

【摘要】：目的:子痫前期(preeclampsia,PE)作为妊娠期一种复杂的综合征,其发病机制尚不明确,且临床上缺乏有效的预测指标。本研究通过对比PE孕妇、健康孕妇以及非妊娠期健康女性外周血中各种细胞源性微囊泡(cell-derived microvesicles,CMVs)、CMVs清除蛋白以及血小板(platelets,PLT)、白细胞(white blood cells,WBC)和内皮细胞(endothelial cells,EC)间粘附水平的差异,以及各自分娩前后的变化,初步探讨CMVs、CMVs清除蛋白及PLT、WBC、EC间粘附在PE发病中的临床意义,试图为PE的临床预测寻找敏感的生物标志物,为PE新的治疗思路提供一定的理论依据。方法:第一部分:应用流式细胞技术检测PE孕妇、健康孕妇以及非孕期健康女性外周血中CMVs总数、合体滋养细胞源性微囊泡(syncytiotrophoblast microvesicles,STBMVs)总数以及Annexin V阳性(AV+)CMVs、STBMVs、血小板源性微囊泡(platelet-derived microvesicles,PMVs)、内皮细胞源性微囊泡(endothelial-derived microvesicles,EMVs)、白细胞源性微囊泡(leukocyte-derived microvesicles,LMVs)、红细胞源性微囊泡(red blood cell-derived microvesicles,RMVs)水平在各组间的差异,以及PE孕妇、健康孕妇分娩前后的变化。第二部分:应用ELISA法检测PE孕妇、健康孕妇以及非孕期健康女性外周血中CMVs清除蛋白Lactadherin、DEL-1、Annexin V水平在各组间的差异,以及PE孕妇、健康孕妇分娩前后的变化。第三部分:应用流式细胞技术检测PE孕妇、健康孕妇以及非妊娠期健康女性外周血中PLT与WBC、PLT与EC间粘附水平,以及PLT表面表达CD62P的差异,以及分娩前后的变化。结果:第一部分:(1)妊娠期PE孕妇总CMVs水平升高,分别是健康孕妇的3.3倍、非孕期女性的4.4倍。分娩后,健康孕妇降至分娩前的15.3%~15.8%;PE孕妇降至分娩前水平的5.3%~8.7%。(2)妊娠期PE孕妇Annexin V阳性(AV+)CMVs水平明显升高,分别是健康孕妇的5.0倍、非孕期女性的15.9倍。分娩后,健康孕妇降至分娩前的12.4%~15.7%;PE孕妇降至分娩前的4.5%~5.3%。(3)妊娠期总STBMVs水平明显升高,PE孕妇是健康孕妇的4.1倍、非孕期女性的9.6倍;健康孕妇是非孕期女性的2.4倍。分娩后,健康孕妇降至分娩前的20.3%~23.2%;PE孕妇降至分娩前水平的3.5%~6.0%。(4)妊娠期AV+STBMVs水平显著升高,PE孕妇是健康孕妇的7.7倍、非孕期女性的41.1倍;健康孕妇是非孕期女性的5.4倍。分娩后,健康孕妇降至分娩前的17.1%~20.4%;PE孕妇显著下降,为分娩前的2.3%~2.9%。(5)妊娠期PE孕妇AV+PMVs水平升高,分别是健康孕妇的4.8倍、非孕期女性的15.5倍。分娩后,健康孕妇产后1天降至分娩前水平的33%,产后3~4天恢复至分娩前水平;PE孕妇降至分娩前水平的19.3%~21.6%。(6)妊娠期AV+EMVs水平升高,PE孕妇是健康孕妇的2.3倍、非孕期女性的6.6倍;健康孕妇是非孕期女性的2.9倍。分娩后,健康孕妇无明显变化;PE孕妇降至分娩前水平的38.1%。(7)妊娠期PE孕妇AV+LMVs水平升高,是非孕期女性的10.5倍,与健康孕妇水平无统计学差异。分娩后,健康孕妇和PE孕妇水平较分娩前均无明显变化。(8)妊娠期AV+RMVs水平升高,PE孕妇是健康孕妇的5.2倍、非孕期女性的17.7倍;健康孕妇是非孕期女性的3.4倍。分娩后健康孕妇无明显下降;PE孕妇降至分娩前水平的24.3%~29.4%。(9)妊娠平均32~33周时,AV+STBMVs、AV+CMVs、总STBMVs和总CMVs诊断PE的预测界限值依次为3630个/μl、7995个/μl、21×10~4个/μl、66.4×10~4个/μl。其中AV+STBMVs对预测PE的诊断价值最高,其灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为85.4%、97.1%、96.7%和82.5%。第二部分:(1)妊娠期Lactadherin在PE孕妇明显升高,是健康孕妇的1.7倍、非孕期女性的2.9倍,而健康孕妇与非孕期女性水平无统计学差异;在分娩后4天内,健康孕妇和PE孕妇水平较分娩前均未见明显变化。(2)妊娠期Lactadherin与AV+CMVs、AV+STBMVs相关性最高,相关系数分别为0.525和0.524。(3)妊娠平均32~33周时,Lactadherin对诊断PE的预测界限值为2541 pg/ml,其灵敏度、特异度、阳性预测值以及阴性预测值分别为57.6%、92.0%、90.5%、62.2%。(4)AV+STBMVs与Lactadherin两者联合检测预测PE,比AV+STBMVs单独检测灵敏度提高(97.0%vs 85.4%);比Lactadherin单独检测时,灵敏度大幅度提高(97.0%vs 57.6%),阳性预测值明显升高(95.7%vs 62.2%)。(5)妊娠期PE孕妇外周血中DEL-1的水平与非孕期女性、健康孕妇无统计学差异;但分娩后,健康孕妇降至分娩前的74.3%~80.0%;PE孕妇降至分娩前水平的68.7%~87.5%。(6)妊娠期PE孕妇外周血中Annexin V水平与非孕期女性、健康孕妇相比无统计学差异;在分娩后4天内,健康孕妇和PE孕妇水平较分娩前均未见明显变化。第三部分:(1)妊娠期PE孕妇PLT-WBC粘附比例升高,分别是健康孕妇的1.6倍、非孕期女性的4.1倍,健康孕妇是非孕期女性的2.5倍。分娩后,健康孕妇PLT-WBC粘附比例升高至分娩前的1.6倍,而产后3~4天内PE孕妇未见明显变化。(2)妊娠期PE孕妇PLT-EC粘附水平与非孕期女性、健康孕妇无统计学差异;分娩后健康孕妇和PE孕妇水平亦无明显变化。(3)妊娠期PE孕妇PLT表面CD62P表达率升高,分别是健康孕妇的3.4倍、非孕期女性的7.4倍。健康孕妇PLT表面CD62P表达率在产后3~4天降至分娩前的72.7%;分娩后,PE孕妇降至分娩前27.0%~43.2%。结论:第一部分:(1)妊娠期PE孕妇CMVs总数较正常孕妇增加,以膜表面高表达磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)的AV+CMVs升高更为显著,可能与PE孕妇的高凝状态密切相关。(2)妊娠期PE孕妇各种AV+的CMVs水平比健康孕妇、非孕期女性有不同程度地升高,其中以胎盘源性的AV+STBMVs升高最为显著;且AV+STBMVs在产后1天迅速降至健康产妇水平,与胎盘娩出后PE孕妇病情可迅速缓解相一致。提示PE孕妇血循环中AV+STBMVs异常增多可能参与PE的发病。(3)妊娠32~33周时诊断PE的预测价值从高至低依次为AV+STBMVsAV+CMVs总STBMVs总CMVs。第二部分:(1)妊娠期Lactadherin与AV+CMVs、AV+STBMVs相关性较强,提示膜表面高表达PS的CMVs可能是Lactadherin代偿性增高的主要诱发因素。(2)妊娠期DEL-1和Annexin V变化在孕妇外周血中的表达水平相对恒定,可能对PE发病过程体内异常增多的CMVs的清除作用有限。第三部分:PE孕妇外周血中血小板与白细胞间粘附、血小板活化在PE微血栓栓塞和炎症反应等的病理过程中可能起一定的作用。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R714.244
【图文】：

微囊,微粒,位置,孕妇

应用 Megamix 标准微粒确定微囊泡位置；B，圈选 P1 区；C，圈选 Counting Beads；D，FITC-IgG 同型对照；E，AnnexinV EDTA 对照；F，AnnexinV 和 STBMVs 双阳性区根据图 1.1 FCM 的设定方法，其中图 1.1 B 中的 P1 区为外周血中 CMVs 总数。图 1.1 F 中 Q2-1+Q4-1 区域为 AV+ CMVs 总数，Q1-1+Q2-1 区域为FITC-STBMVs 总数，Q2-1 区为 AV+ STBMVs 总数。流式细胞仪 CMVs 浓度的计算方法为 CMV（s个/μl）=（检测样本所含 CMVs数 / 检测 Counting Beads 数）×（20240 / 检测样本体积 μl ）。图 1.2 显示三组研究对象外周血中总 CMVs 水平及分娩前后的变化。K-S 检验变量为非正态分布，各组平均值采用中位数表示。非孕女性组 36.9×104个/μl、正常孕妇产前、产后 1 天、产后 3～4 天分别为 48.6×104个/μl、7.7×104个/μl 和7.5×104个/μl，PE孕妇产前、产后1天、产后3～4天分别为160.2×104个/μl、8.6×104个/μl 和 14.0×104个/μl。PE 孕妇比正常孕妇、非孕女性外周血的总 CMVs 水平显著升高（P<0.05），正常孕妇较非孕期女性有升高趋势，但无统计学差异（P=0.337）。PE 孕妇、正常孕妇分娩后总 CMVs 水平都存在明显下降（P<0.05），正常孕妇产后 1 天和产后 3～4 天水平无明显差异（P=0.495），PE 组产后 1 天和

方法,孕妇,外周血,总数

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