叶酸诱导EMT在宫颈癌细胞中的作用研究

发布时间：2020-07-09 19:23

【摘要】：宫颈癌(cervical cancer)严重危害现代女性的身心健康,目前其发病率居女性恶性肿瘤的第四位。尽管随着目前宫颈癌筛查工作的实施有助于显着降低宫颈癌的发病率和死亡率,但宫颈癌筛查仅可尽早检查出部分宫颈癌前病变,不能筛查全部的宫颈病变,也不能筛查具有风险因素的高危人群。故寻找影响宫颈病变的相关因素并进一步研究其致宫颈癌发生的分子机制,可避免对相应良性病变进行检测和不必要的治疗,并可且为提出宫颈癌新的预防措施提供理论依据。叶酸属于水溶性B族维生素,其参与DNA的合成,并能通过影响表观遗传修饰来调控基因的表达。叶酸近年来被发现在多种上皮恶性肿瘤的进展和预防方面发挥重要作用。这些研究一致地提示叶酸摄入量(膳食和膳食补充)或叶酸的血液测量值与这些恶性肿瘤呈反向关联。上皮-间质转化(EMT)可以通过各种机制引起器官纤维化及在肿瘤发生与发展中起着重要的作用。EMT赋予宫颈癌细胞迁移和侵袭特性,诱导间充质干细胞特性,防止细胞凋亡和衰老,并可逃逸免疫应答。本实验通过使用不同浓度的叶酸干预宫颈癌Siha细胞,分析未经叶酸干预后与经叶酸干预后的宫颈癌Siha细胞中EMT相关蛋白E-钙粘蛋白及波形蛋白的表达情况,分析叶酸、EMT及宫颈病变之间的关系,为宫颈癌的防控提供可靠依据。目的:探讨叶酸是否可以影响宫颈癌Siha细胞中EMT的标志物E-钙粘蛋白与波形蛋白的表达,分析叶酸是否参与宫颈上皮间质转化,进而影响宫颈癌细胞的生长、侵袭及转移。方法:1.对宫颈癌Siha细胞进行培养,并用不同浓度的叶酸进行干预;2.运用MTT实验方法检测培养基中含有叶酸的Siha细胞的增殖速率与未经叶酸干预的空白对照组即A组的细胞增殖速率;3.运用划痕实验方法检测培养基中含有叶酸的Siha细胞的转移能力与未经叶酸干预的空白对照组即A组的细胞转移能力;4.运用Transwell侵袭实验检测培养基中含叶酸的Siha细胞的迁徙能力与空白对照组中Siha细胞的迁徙能力;5.运用Western Blotting方法检测培养基中含叶酸的Siha细胞波形蛋白、E-钙粘蛋白的表达量与未经叶酸干预的空白对照组中Siha细胞波形蛋白、E-钙粘蛋白的表达量。6.统计方法均采用SPSS22.0软件进行,组间差异采用单因素方差分析进行统计,所有的计量资料符合正态分布均采用均数±标准差(X±S)形式表示,P0.05为差异存在统计学意义。结果:1.MTT实验方法检测到培养基中含有叶酸的Siha细胞的增殖速率低于不含叶酸的空白对照组,并且随着叶酸浓度的升高Siha细胞增殖的速率逐渐降低。2.划痕实验检测到培养基中含有叶酸的Siha细胞的转移能力低于不含叶酸的空白对照组,并且随着叶酸浓度的升高Siha细胞转移能力逐渐降低。3.Transwell侵袭实验检测到培养基中含叶酸的Siha细胞的迁徙能力低于未经叶酸干预的空白对照组,并且随着叶酸浓度的升高Siha细胞迁徙能力逐渐降低。4.Western Blotting方法检测结果显示:培养基中含叶酸的Siha细胞波形蛋白的表达量低于未经叶酸干预的空白对照组,并且随着叶酸浓度的升高Siha细胞波形蛋白的表达逐渐降低;而培养基中含叶酸的Siha细胞E-钙粘蛋白的表达量均高于未经叶酸干预的空白对照组,并且随着叶酸浓度的升高Siha细胞E-钙粘蛋白的表达量逐渐升高,差异具有统计学意义(P0.01)。结论:1.叶酸对宫颈癌细胞的增殖与侵袭能力具有抑制作用。2.叶酸可促进宫颈癌Siha细胞中E-钙粘蛋白的表达,抑制波形蛋白的表达而抑制宫颈癌细胞发生上皮-间质转化(EMT),从而抑制宫颈癌的发生与发展。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.33
【图文】：

曲线,叶酸,细胞增殖,曲线

录不同浓度的叶酸干预后连续 48h，不同线图 2-1（以时间为横坐标、细胞个数为同浓度叶酸干预后，Siha 细胞的增殖能力酸干预）相比，随着叶酸浓度的升高（Bml），Siha 细胞增殖速率逐渐减少,表明细能力具有抑制作用。Cell Count-C20:00 20:00:00Cell Count-C3Time0:00:00 2:00:00 4:00:00 6:00:00 8:00:00 10:00:00 12:00:00 14:00:00 16:00:00 18:00:00 20:00:003603804004204404604805005200:00:00 2:00:00 4:00:00 6:00300320340360380400420440460B 组

叶酸,细胞侵袭,实验检测

D 组图 2-3：Transwell 侵袭实验检测不同浓度叶酸干预后 48h Siha 细胞侵袭能力2.4 Western Blotting 检测不同浓度叶酸对 Siha 细胞中 E-cadherin 蛋白、Vimentin 蛋白表达水平的影响Western Blotting 方法检测结果显示：A 组（未经叶酸干预的 Siha 细胞）细胞中 E-cadherin 蛋白的表达水平低于经叶酸干预组（叶酸浓度：B 组 0.1mol/ml；C 组 0.5mol/ml；D 组 1mol/ml），差异具有统计学意义（P<0.01）。而 A 组（未经任何处理的 Siha 细胞）细胞中 Vimentin 蛋白的表达水平高于经叶酸干预组，差异具有统计学意义（P<0.01）。进一步说明经过叶酸干预后能够使宫颈癌 Siha

波形蛋白,E-钙粘蛋白,钙粘蛋白,情况

D 组图 2-4 ： MTT 检测四组 Siha 细胞 12h、24h、48h 增殖情况Figure2β-actin β-actinE-钙粘蛋白波形蛋白图 A 图 B图 2-5：图 A、B 为四组 Siha 细胞中 E-钙粘蛋白、波形蛋白的表达（从左到右依次为 A 组、B 组、C 组、D 组）

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