miR-375对宫颈癌细胞生物学特性的影响及其对IGF-1R基因调控的初步研究

发布时间：2017-03-31 03:17

  本文关键词：miR-375对宫颈癌细胞生物学特性的影响及其对IGF-1R基因调控的初步研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:micro-RNA异常表达是导致宫颈癌的重要病因。课题组前期研究发现:与正常宫颈组织相比,宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中mi R-375的表达水平明显下调。本实验旨在通过对宫颈癌细胞及正常上皮细胞mi R-375表达水平的检测,验证前期实验结果;通过干扰宫颈癌细胞mi R-375的表达,深入研究mi R-375对宫颈癌细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响,初步判断mi R-375下游调控的靶基因,从而阐明mi R-375在宫颈癌发生发展中作用的可能分子机制。方法:(1)常规培养宫颈癌细胞株(Caski、C33A)及正常上皮细胞株(293T),并利用RT-PCR技术检测三种细胞中mi R-375的表达水平;(2)利用转染试剂si RNA MateTM将mi R-375模拟物或mi R-375抑制物片段转染入HPV16阳性的宫颈癌细胞Caski中,使mi R-375过表达或抑制表达,利用RT-PCR技术验证mi R-375的表达水平的变化;(3)利用CCK8、划痕实验及凋亡实验检测过表达或抑制表达mi R-375对宫颈癌细胞Caski增殖、迁移及凋亡等生物学行为的影响;(4)利用Western blot技术检测Caski细胞转染后下游靶基因IGF-1R表达水平的变化。结果:(1)293T细胞、Caski细胞、C33A细胞中mi R-375的相对表达量为分别为0.885±0.034,0.050±0.004,0.080±0.003。与正常上皮细胞相比,宫颈癌细胞中mi R-375的表达水平的表达均明显下降,差异有统计学意义(P0.05);(2)Caski细胞转染后,mi R-375模拟物组中mi R-375的表达增加了约7.76倍,细胞增殖及迁移能力明显降低,细胞凋亡明显增加,IGF-1R蛋白表达降低至24.73%,与相应的阴性对照组相比,差异有统计学意义(P0.05);相反,mi R-375抑制物的转染使mi R-375的表达降低至14.39%,细胞增殖及迁移能力均明显增加,细胞凋亡均明显减少,IGF-1R蛋白表达增加了2.29倍,与相应的阴性对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。空白对照组与各阴性对照组之间差异均没有统计学意义(P0.05)。结论:(1)与正常上皮细胞株相比,mi R-375的表达在宫颈癌Caski、C33A细胞中明显下调,说明mi R-375在宫颈癌中发挥抑癌作用;(2)在Caski细胞中,过表达mi R-375能够抑制细胞的增殖及迁移,促进细胞的凋亡,并可降低IGF-1R蛋白的表达;而mi R-375的表达减少能够促进细胞的增殖及迁移,抑制细胞凋亡,并增加IGF-1R蛋白的表达。说明mi R-375对宫颈癌细胞增殖、凋亡及迁移等生物学行为有一定的影响,并且可能是通过调控IGF-1R蛋白表达来发挥作用的。
【关键词】：宫颈癌 microRNA 细胞转染 IGF-1R 细胞凋亡
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 常用缩写词中英文对照表10-11
• 前言11-13
• 第一部分MIR-375 在宫颈癌细胞及正常上皮细胞中的表达13-24
• 1 材料与方法13-19
• 1.1 细胞来源13
• 1.2 主要试剂13
• 1.3 主要仪器13-14
• 1.4 主要溶液的配制14
• 1.5 实验前准备14
• 1.6 细胞培养14-16
• 1.7 细胞总RNA的提取16
• 1.8 逆转录反应16-17
• 1.9 实时荧光定量PCR反应扩增目的片段17-18
• 1.10 统计学方法18-19
• 2 结果19-21
• 2.1 细胞总RNA提取质量19
• 2.2 实时荧光定量PCR方法检测宫颈癌细胞及正常上皮细胞中的MIR-375 的表达水平19-21
• 3 讨论21-23
• 4 结论23-24
• 第二部分MIR-375 对宫颈癌细胞生物学特性的影响及其对IGF-1R靶基因调控的初步研究24-46
• 1 材料与方法24-34
• 1.1 细胞来源24
• 1.2 主要试剂及耗材24-25
• 1.3 主要仪器25-26
• 1.4 主要溶液的配制26
• 1.5 细胞培养26-27
• 1.6 细胞转染27-29
• 1.7 转染效率的检测29
• 1.8 实时荧光定量PCR检测29
• 1.9 CCK-8 法检测细胞增殖情况29-30
• 1.10 细胞迁移实验30
• 1.11 ANNEXIN V-FITC&PI凋亡试剂盒检测细胞凋亡30-31
• 1.12 WESTERN-BLOT技术检测IGF-1R的表达水平31-33
• 1.13 统计学处理33-34
• 2 结果34-41
• 2.1 细胞转染效率检测34
• 2.2 实时荧光定量PCR技术检测转染MIR-375 模拟物、MIR-375 抑制物后MIR-375的表达水平34-35
• 2.3 CCK-8 法检测MIR-375 过表达或低表达对宫颈癌细胞增殖的影响35-36
• 2.4 流式细胞术检测MIR-375 过表达或低表达对宫颈癌细胞凋亡的影响36-38
• 2.5 划痕实验检测MIR-375 过表达或抑制表达对宫颈癌细胞迁移能力的影响38-39
• 2.6 WESTERN BLOT方法检测MIR-375 过表达或抑制表达对IGF-1R蛋白表达的影响39-41
• 3 讨论41-45
• 4 结论45-46
• 参考文献46-51
• 综述51-60
• 参考文献57-60
• 致谢60-61
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果61-62
• 个人简历62

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 梁华;李艳;洛若愚;申复进;;MicroRNA-215 Is a Potential Prognostic Marker for Cervical Cancer[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2014年02期

2 伍娇娇;冯定庆;田园;徐汉杰;李兵;凌斌;;组蛋白乙酰化修饰调控RAR-β_2表达与宫颈病变的相关性[J];中国肿瘤临床;2014年05期

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本文编号：278767