烷基化一氧化氮对人卵巢癌SKOV3细胞增殖迁移的影响及其机制研究

发布时间：2020-08-15 21:47

【摘要】：近年来,癌症已成为人们关注最多的公共健康问题,严重影响了人类的健康,卵巢癌已经为21世纪女性妇科恶性肿瘤死亡的主要原因之一。每年卵巢癌导致全球662000人死亡,其中大约一半患者出现在中国。另外卵巢癌由于起病隐匿,肿瘤位于盆腔深处,所以大部分卵巢癌患者早期不易察觉,难以准确识别并判断,待出现机体症状并得到确诊时,己成为癌症中晚期阶段,并伴随腹膜种植和远处转移情况。目前卵巢癌的治疗手段主要有手术治疗、化学治疗、放射治疗、生物治疗等方法,但这些治疗手段不仅费用昂贵还会引起患者身体产生毒副作用。一氧化氮(NO)是由肿瘤、基质和内皮细胞产生的多功能气体分子,通过多种途径在肿瘤生物学中发挥着多方面的作用机制。越来越多的证据表明,卵巢癌的生长、凋亡、肿瘤基质细胞的相互作用、血管生成和对化疗的反应等方面均有NO信号通路参与。烷基化一氧化氮类化合物作为一种体外参与NO信号通路中促进可溶性鸟苷酸环化酶的活性的物质,并可以促进下游cGMP含量的产生,目前,还没有系统的研究阐述烷基化一氧化氮类化合物对于肿瘤细胞的增殖,迁移等方面的影响。通过本实验研究,利用MTT法初步从三类RNO化合物中筛选出对于卵巢癌细胞SKOV-3活力增产生影响并表现出抑制细胞活性趋势的硝基环己烷,并以硝基环己烷作为研究考察对象,结果显示,硝基环己烷不仅抑制卵巢癌细胞SKOV-3的细胞活性,增殖,还会引起SKOV-3细胞内的细胞膜通透性增加,细胞核皱缩,诱导细胞凋亡,并阻滞细胞周期于G2/S期,ROS水平增加,线粒体膜电位凋亡性转变,通过Western Blot检测细胞中凋亡相关蛋白PARP、cleavedPARP、Bcl2、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-8、cleaved-Caspase-9等在细胞内的表达情况,激活Caspase级联反应等。以上说明硝基环己烷能够引起卵巢癌细胞SKOV-3发生凋亡性转变并显著调节细胞内氧化应激水平。通过荧光实时定量PCR和Western blot实验发现在硝基环己烷刺激作用下,卵巢癌细胞SKOV-3迁移标志物在mRNA水平上和蛋白水平上都收到影响,且通过实验数据发现硝基环己烷对于SKOV-3细胞的迁移具有抑制作用,且随着加药刺激的浓度和时间的增加呈现出明显的抑制作用,通过细胞划痕以及Transwell细胞侵袭实验我们可以得出硝基环己烷具有可抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭的效果。通过ELISA法我们检测到了正常卵巢上皮细胞Hesopic和卵巢癌上皮细胞SKOV-3在cGMP含量水平上的差异,并且在通过加药处理后发现硝基环己烷可以一定程度上降低cGMP含量,通过Western blot法我们在蛋白水平上检测了卵巢癌细胞SKOV-3内NO信号通路以及NOTCH信号通路相关蛋白的表达水平,并通过加药处理得知在硝基环己烷的刺激下,NOTCH 1的蛋白表达水平下降,并且协同调节了NO信号通路中GUCY1B3蛋白表达的下降,从而调节了细胞cGMP含量的下降。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.31
【图文】：

存活率,硝基环己烷,生存率,组间

图 2.1 不同 RNO 在不同浓度条件下对卵巢细胞存活率的影响2.4.1.2 探究在不同浓度以及作用时间下硝基环己烷对 SKOV-3 细胞增殖的影响通过不同浓度的硝基环己烷分别作用于卵巢癌细胞 SKOV-3 24h、48h、72h后发现，细胞生长明显受到抑制，且呈现浓度和时间的依赖性。与对照组相比1)1μM、2μM、5μM 浓度组的硝基环己烷无明显抑制作用，没有统计学意义；2)，10μM、12μM、15μM、20μM 浓度组的硝基环己烷均能抑制细胞增殖，具有统计学意义，其中 12μM、15μM 组具有显著性差异，20μM 组具有极显著差异。故取终浓度为 12μM、20μM 的硝基环己烷进行后面一系列的实验，如图 2.2。而加药处理时间方面，1）24h 各组间的生存率有显著差异；2）48h 各组间的生存率有均有极显著差异；3）72h 各组间的生存率均有极显著差异如图 2.3。

卵巢癌细胞,硝基环己烷,增殖抑制,一氧化氮

不同浓度的硝基环己烷作用于卵巢癌细胞SKOV-324h的增殖抑制检测

硝基环己烷,增殖抑制,卵巢癌细胞,细胞存活率

不同浓度硝基环己烷作用于SKOV-3细胞24h、48h、72h后细胞存活率

【参考文献】