VPA联合ATRA促进子宫颈癌细胞衰老的发生

发布时间：2017-04-03 12:07

  本文关键词：VPA联合ATRA促进子宫颈癌细胞衰老的发生，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景宫颈癌是最常见的女性生殖道恶性肿瘤,发病率仅次于乳腺癌位居第二的女性恶性肿瘤。近年来宫颈癌的发病率有明显上升和年轻化趋势,发病以每年2%~3%的速度增长。早期宫颈癌患者可采用手术治疗,而晚期患者主要以铂类化疗为主,但毒副作用大,患者易对其产生耐药性,从而限制了进一步的治疗,使患者生存率大大降低。因此,急需一种有效且毒副作用低的宫颈癌治疗手段。传统观点认为遗传基因的突变在肿瘤的形成过程中起着至关重要的作用,随着近年来分子生物学的发展,表观遗传的改变在肿瘤发展中作用被人们所认识,从而打破了以往“基因决定论”的观点。表观遗传是不依赖于DNA序列的遗传现象,表观遗传异常主要包括DNA甲基化异常、非编码RNA的异常调节、组蛋白修饰异常等。越来越多的研究证实,表观遗传异常与子宫颈癌的发生、发展有着密切关系。丙戊酸钠(valproate acid,VPA)是一种广谱的抗癫痫药物,同时也是一种组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂。体外实验证实,VPA在多种实体瘤和白血病中有抑制细胞增殖、促进凋亡和诱导分化的作用,其高效、安全、低毒、可口服的特点使之极具临床前景。全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)是维生素A的生物活性代谢产物,与其受体结合,具有促进上皮细胞分化成熟的作用,已作为一种诱导分化剂用于临床肿瘤的治疗。课题组前期的研究已经证实VPA联合ATRA可使宫颈癌细胞发生细胞周期阻滞,并诱导细胞分化,但细胞凋亡增加不明显。在此基础上,进一步分析VPA联合ATRA的抗宫颈癌作用,观察其对细胞衰老的影响并探讨其可能的分子机制,从而为寻求新的子宫颈癌治疗方法提供参考。目的:研究VPA联合ATRA诱导子宫颈癌细胞衰老作用,并探讨其分子机制。方法实验分为对照组、VPA组、ATRA组、VPA+ATRA组,采用3 mmol/L VPA、1mmol/L ATRA单独或联合作用于人子宫颈癌Hela及Siha细胞,对照组仅加溶媒;采用CellTiter 96#174;AQueous法检测细胞增殖;Annexin V-PE/7AAD法检测细胞凋亡;β-半乳糖苷酶化学染色法检测细胞衰老;Q-PCR和Western blot法分别检测衰老相关基因P16、P63、hTERT的mRNA和蛋白表达变化;采用免疫组织化学SP法检测P16、P63及hTERT的表达;Cell cycle staining solution法检测细胞周期结果(1)Cell Titer 96#174;AQueous法检测结果显示,VPA对HeLa及SiHa细胞均有生长抑制作用,与ATRA联合抑制效果明显优于单独用药(P0.05);(2)我们采用流式细胞技术检测细胞凋亡,结果显示:VPA单独或联合ATRA后对HeLa、SiHa细胞凋亡增加都不明显;(3)SA-β-半乳糖苷酶染色显示,VPA联合ATRA显著增加衰老细胞比例,与对照组及单独用药组比较,差异有统计学意义(P0.05);(4)Q-PCR和Western blot结果显示,VPA单独和联合ATRA可上调P16、P63的表达,降低h TERT的表达,且联合用药组优于单独用药组及对照组(P0.05);(5)免疫组化结果发现,VPA组、ATRA组中P16、P63的表达都是增加的,与对照组比较有统计学意义(P0.05),且两药联合后效果更明显(P0.05);(6)Cell cycle staining solution法检测细胞周期结果显示,VPA联合ATRA引起宫颈癌细胞G1期受阻滞结论VPA联合ATRA可抑制宫颈癌细胞增殖;上调P16和P63,下调hTERT的表达,从而诱导细胞衰老是其可能的分子机制。
【关键词】：子宫颈癌 丙戊酸钠 全反式维甲酸 细胞衰老
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33

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本文编号：284289