miR-568靶向CDK4对宫颈癌Hela细胞生长增殖的影响

发布时间：2017-04-04 23:14

  本文关键词：miR-568靶向CDK4对宫颈癌Hela细胞生长增殖的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:研究宫颈癌中miR-568与细胞周期依赖性激酶4(CDK4)之间的关系,分析CDK4是否是miR-568的靶基因,探讨miR-568靶向CDK4抑制宫颈癌Hela细胞生长增殖的分子机制。方法:首先通过生物信息学方法,发现20个miRNAs可能是CDK4的潜在靶miRNAs;进一步计算分析后发现,miR-568是CDK4的最佳结合靶miRNA。在重组细胞株Hela-miR-568 mimics、Hela-miR-Scramble、Hela-miR-568 inhibitors以及Hela中,q RT-PCR检测miR-568的表达,western blot检测CDK4、Cyclin D1的表达,分析miR-568是否与CDK4结合;细胞计数方法绘制四个细胞株的生长曲线,细胞倍增时间,流式细胞技术检测细胞周期分布。结果:(1)生物信息学方法发现与CDK4结合的靶miRNAs有20个;其中,miR-568是与CDK4的结合稳定性最好,特异性最强的靶miRNA。(2)Hela-miR-568 mimics较Hela、Hela-miR-Scramble的细胞生长速度明显减慢,Hela-miR-568 inhibitors较Hela、Hela-miR-Scramble的细胞生长速度明显增加。Hela、Hela-miR-Scramble、Hela-miR-568 inhibitors、Hela-miR-568 mimics细胞生长的倍增时间分别为16小时、16小时、10小时、26小时。(3)Hela-miR-568 inhibitors细胞株中miR-568表达水平下调后,导致CDK4表达水平增高,Cyclin D1的蛋白水平也上调;Hela-miR-568 mimics细胞株中miR-568表达水平增高,而CDK4蛋白水平下调,Cyclin D1的蛋白水平也下调;而Hela和Hela-miR-Scramble比较,miR-568、CDK4、Cyclin D1表达均无明显差异。(4)Hela-miR-568 inhibitors的G1、S期细胞百分比高于Hela-miR-Scramble,而G2/M期低于Hela-miR-Scramble,差异比较均有显著性意义(P0.05);Hela-miR-568 mimics的G1、S期细胞百分比低于Hela-miR-Scramble,而G2/M期高于Hela-miR-Scramble,差异均有显著性意义(P0.05)。结论:(1)CDK4是miRNA-568的下游靶基因。(2)miRNA-568靶向CDK4,下调Cyclin D1的表达,抑制宫颈癌Hela细胞的生长和增殖。
【关键词】：miRNA 宫颈癌 生长与增殖 CDK4 Cyclin D1
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 主要缩略英文索引8-10
• 第1章 引言10-12
• 技术路线12-14
• 第2章 材料与方法14-18
• 2.1 材料14-15
• 2.2 实验方法15-18
• 第3章 结果18-24
• 讨论24-28
• 结论28-30
• 参考文献30-36
• 综述 MicroRNA在宫颈癌中的研究进展36-52
• 综述参考文献46-52
• 作者攻读学位期间公开发表的论文52-54
• 致谢54

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本文编号：286075