不同因素对早期胚胎线粒体DNA拷贝数影响的研究
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【摘要】：背景：线粒体是哺乳动物中非常重要的细胞器,可产生ATP,在卵母细胞成熟及早期胚胎发育中供应能量,线粒体的数目和功能对于早期胚胎的发育至关重要。线粒体DNA拷贝数变化可反映线粒体的功能状态。目前,关于线粒体DNA拷贝数在不同动物的卵母细胞成熟、精子质量等相关研究已见报道，但有关线粒体DNA拷贝数在人胚胎发育中的研究较少,这可能与人胚胎样本珍贵等原因有关。高通量测序作为新型基因测序技术,已经广泛应用于基因检测和遗传物质相关性疾病等领域的研究。随着生殖技术的发展,第三代试管技术在植入前遗传学检查方面发挥了巨大的作用,其中包括PGD和PGS,PGD可检测配子、胚胎的遗传物质,PGS主要筛查胚胎染色体的非整倍性异常。高通量测序技术联合第三代试管技术，使得研究者在不损害胚胎资源的前提下,对胚胎进行活检基因检测成为可能。目的：通过研究不同胚胎形态学参数与临床因素下早期胚胎线粒体DNA拷贝数的变化,分析其相关关系,以期通过形态学参数、临床因素预估胚胎线粒体DNA拷贝数,综合评估早期胚胎的发育潜能,更多的了解胚胎发育过程。方法：选取2014年3月-2015年9月在我院生殖中心进行第三代试管技术(PGD/PDS)的39对夫妇的早期胚胎279例,根据临床需要,选择受精后D3、D5、D6、D7时胚胎进行卵裂球、囊胚滋养层细胞活检,活检后胚胎进行玻璃化冷冻,活检细胞则使用高通量测序技术进行基因检测,分析各因素对早期胚胎线粒体DNA拷贝数的影响关系。结果：1.D2时Ⅰ级胚胎与Ⅰ级以上胚胎的囊胚期线粒体DNA拷贝数分别是504.69±85.222、34335.25±16042.469(P0.05)：2.D2胚胎碎片≤5%组与胎碎片5%组囊胚期线粒体DNA拷贝数分别是平均为519.94±77.708、43204.84±20135.024(P0.05)：D3胚胎碎片≤5%组与5%组的囊胚期线粒体DNA拷贝数分别平均为2975.88±2347.526、35730.41±16724.325(P0.05),D2、D3胚胎碎片率与囊胚期mtDNA拷贝数分别有统计学差异;3.D2胚胎卵裂球数目≤3细胞、4细胞、≥5细胞的胚胎线粒体DNA拷贝数分别为24442.91±14952.26、749.62±212.24、48807.06±31535.96,两两比较发现三组之间具有显著性统计学差异;D3胚胎卵裂球数≤6细胞、7-8细胞、≥9细胞线粒体DNA拷贝数分别为45059.98±24203.006、3484.74±2831.457、9382.31±8699.437，两两比较发现三组之间具有显著性统计学差异;4.女性年龄、男性年龄、不孕年限、基础卵泡刺激素水平、促性腺激素(Gn)用量等均与早期胚胎线粒体DNA拷贝数无统计学差异。结论：早期胚胎线粒体DNA拷贝数与不同的胚胎级别、碎片率、D2和D3时胚胎卵裂球数目相关,胚胎级别高、碎片率低、D2和D3时胚胎卵裂球数目分别为4-和7-8细胞的胚胎,胚胎发育潜能可能相对较高,胚胎移植应优选选择。
【关键词】：DNA 线粒体 胚胎发育 形态学参数 临床因素 PGD/PGS 高通量测序
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R714
【目录】：
- 中英文缩略词表5-6
- 中文摘要6-8
- 英文摘要8-10
- 前言10-12
- 技术路线12-13
- 实验材料13-14
- 实验方法14-18
- 实验结果18-23
- 讨论23-25
- 结论25-26
- 全文小结26-27
- 参考文献27-30
- 文献综述30-46
- 参考文献39-46
- 硕士期间发表论文46-47
- 致谢47
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